Kožné zápalové ochorenia výrazne znižujú kvalitu života a ich liečba je orientovaná na imunomoduláciu. Táto práca sa zaoberá štúdiom vplyvu triptánov na obnovenie expresie bariérových génov hornerínu, filagrínu a involukrínu po jej znížení v chemicky indukovanom zápalu podobnom stave. Najskôr bola stanovená expresia cytokínov na úrovni mRNA po pôsobení rozličných koncentrácií imiquimodu - látky, ktorá sa v myšiach používa pri indukovaní psoriatického modelu kože. Keďže imiquimod expresiu cytokínov výrazne neovplyvňoval, prešlo sa k indukcii chemického zápalu použitím IL-17A, IL-1 a TNF po dobu 24 a 48 hodín a následne sledovaniu ich vplyvu na expresiu bariérových génov. V oboch inkubáciách cytokíny znižovali expresiu bariérových génov, najviac ju znižoval TNF. Následne bola sledovaná expresia bariérových génov po 24 hodinovom co-treatmente, v ktorom bola využitá kombinácia cytokínov s avitriptánom, donitriptánom, eletriptánom a rizatriptánom. Ani jednému z triptánov sa nepodarilo obnoviť expresiu bariérových génov.
Anotace v angličtině
Skin inflammatory diseases significantly lower quality of life and can be treated by immunomodulation. This thesis studies the impact of triptans on restoring the expression of barrier genes hornerin, filaggrin and involucrin after it has been reduced by chemically induced inflammation-like state. Firstly, mRNA expression of cytokines was measured after treatment with various concentrations of imiquimod - a substance used in inducing a psoriasis-like state in mice models. Imiquimod didn't significantly alter the expression of cytokines, which is why chemical inflammation was then induced by IL-17A, IL-1 and TNF in 24 and 48 hours. Then, the mRNA expression of barrier genes was measured. Cytokines decreased the expression of barrier genes with the biggest reduction seen after using TNF. Lastly, the expression of barrier genes mRNA was measured after co-treatment of cytokine mixture with avitriptan, donitriptan, eletriptan and rizatriptan. The triptans were not able to restore the expression of any of the barrier genes.
Kožné zápalové ochorenia výrazne znižujú kvalitu života a ich liečba je orientovaná na imunomoduláciu. Táto práca sa zaoberá štúdiom vplyvu triptánov na obnovenie expresie bariérových génov hornerínu, filagrínu a involukrínu po jej znížení v chemicky indukovanom zápalu podobnom stave. Najskôr bola stanovená expresia cytokínov na úrovni mRNA po pôsobení rozličných koncentrácií imiquimodu - látky, ktorá sa v myšiach používa pri indukovaní psoriatického modelu kože. Keďže imiquimod expresiu cytokínov výrazne neovplyvňoval, prešlo sa k indukcii chemického zápalu použitím IL-17A, IL-1 a TNF po dobu 24 a 48 hodín a následne sledovaniu ich vplyvu na expresiu bariérových génov. V oboch inkubáciách cytokíny znižovali expresiu bariérových génov, najviac ju znižoval TNF. Následne bola sledovaná expresia bariérových génov po 24 hodinovom co-treatmente, v ktorom bola využitá kombinácia cytokínov s avitriptánom, donitriptánom, eletriptánom a rizatriptánom. Ani jednému z triptánov sa nepodarilo obnoviť expresiu bariérových génov.
Anotace v angličtině
Skin inflammatory diseases significantly lower quality of life and can be treated by immunomodulation. This thesis studies the impact of triptans on restoring the expression of barrier genes hornerin, filaggrin and involucrin after it has been reduced by chemically induced inflammation-like state. Firstly, mRNA expression of cytokines was measured after treatment with various concentrations of imiquimod - a substance used in inducing a psoriasis-like state in mice models. Imiquimod didn't significantly alter the expression of cytokines, which is why chemical inflammation was then induced by IL-17A, IL-1 and TNF in 24 and 48 hours. Then, the mRNA expression of barrier genes was measured. Cytokines decreased the expression of barrier genes with the biggest reduction seen after using TNF. Lastly, the expression of barrier genes mRNA was measured after co-treatment of cytokine mixture with avitriptan, donitriptan, eletriptan and rizatriptan. The triptans were not able to restore the expression of any of the barrier genes.
2) Stanovenie hladiny pro- a protizápalových cytokínov v chemicky indukovanom zápale kožných buniek v prítomnosti triptánov
3) Stanovenie hladiny expresie bariérových génov v zápalovom kožnom modele po expozícii triptánmi
4) Vypracovanie diplomovej práce a multimediálnej prezentácie k obhajobe diplomovej práce
Zásady pro vypracování
1) Vypracovanie rešerše na tému diplomovej práce
2) Stanovenie hladiny pro- a protizápalových cytokínov v chemicky indukovanom zápale kožných buniek v prítomnosti triptánov
3) Stanovenie hladiny expresie bariérových génov v zápalovom kožnom modele po expozícii triptánmi
4) Vypracovanie diplomovej práce a multimediálnej prezentácie k obhajobe diplomovej práce
Seznam doporučené literatury
1) Danuta Gutowska-Owsiak et al: IL-17 downregulates filaggrin and affects keratinocyte expressionof genes associated with cellular adhesion, 2011, Experimental Dermatology
2) Franziska Rademacher et al: Skin microbiota and human 3D skin models, Experiemtal Dermatology, 2018
3) Ellen H. van den Bogaard et al: Genetic and Pharmacological Analysis Identifies a Physiological Role for the AHR in Epidermal Differentiation, Journal of Investigative Dermatology, 2015
4) Jinlei Yu et al: A tryptophan metabolite of the skin microbiota attenuates inflammation in patients with atopic dermatitis through the aryl hydrocarbon receptor, Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2019
5) Ehrlich A, Kerkvliet N: Is chronic AhR activation by rapidly metabolized ligands safe for the treatment of immune-mediated diseases? Current opinion in Toxicology 2, 2017
6) Články publikované v odborných periodikách
Seznam doporučené literatury
1) Danuta Gutowska-Owsiak et al: IL-17 downregulates filaggrin and affects keratinocyte expressionof genes associated with cellular adhesion, 2011, Experimental Dermatology
2) Franziska Rademacher et al: Skin microbiota and human 3D skin models, Experiemtal Dermatology, 2018
3) Ellen H. van den Bogaard et al: Genetic and Pharmacological Analysis Identifies a Physiological Role for the AHR in Epidermal Differentiation, Journal of Investigative Dermatology, 2015
4) Jinlei Yu et al: A tryptophan metabolite of the skin microbiota attenuates inflammation in patients with atopic dermatitis through the aryl hydrocarbon receptor, Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2019
5) Ehrlich A, Kerkvliet N: Is chronic AhR activation by rapidly metabolized ligands safe for the treatment of immune-mediated diseases? Current opinion in Toxicology 2, 2017
6) Články publikované v odborných periodikách
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Obhajobu diplomové práce studentky Bc. Dominiky Trofimenkové zahájil prof. RNDr. Milan Navrátil, CSc. Studentka seznámila komisi s hlavními částmi a výsledky své práce. Následovalo přečtení posudků vedoucího práce doc. Ing. Radima Vrzala Ph.D. a oponentky Mgr. Anety Vrzalové, Ph.D.
Studentka pak reagovala na připomínky a dotazy.
Prezentace studentky obsahovala tato témata:
SALT - charakteristika
kožní záněty - typy a jejich charakteristika
mediátory imunitního systému
charakteristika testovaných látek
design a cíle provedených experimentů
vliv použitých látek na expresi sledovaných bariérových genů
posouzení potenciální vhodnosti použitých látek pro léčbu kožních zánětů
V rozpravě byly uvedeny následující připomínky či nastoleny tyto problémy:
doporučení zařazení schémat pro snazší orientaci v problematice
koncentrace chloridu vápenatého ve zdrojové publikaci a její porovnání s koncentrací použitou ve vlastní práci
požadavky na AhR, aby mohly být zvažovány pro léčbu atopické dermatitidy
příklady biologické léčby kožních onemocnění
zánětlivé markery potenciálně vhodné pro sledování účinku aplikace imiquimodu na kožní buňky
časové rozmezí aplikace cytokininů
aplikace dvou odlišných koncentrací FICZ - použita jen jedna koncentrace
vhodný buněčný model pro studium vlivu zánětu na expresi bariérových genů
popis grafů a použitých svorek, statistické hodnocení
vysvětlení termínů SALT, chemosenzor
Studentka na dotazy položené oponentkou práce a členy komise reagovala pohotově, adekvátně, se znalostí problematiky.