U bakterií B. burgdorferi sensu lato způsobujících lymeskou boreliózu je i po mnoha letech výzkumu stále mnoho otazníků. Doposud existuje mnoho nejasností ohledně rozdílných morfologických forem, které tyto bakterie mohou vytvářet v závislosti na nepříznivých podmínkách prostředí či v reakci na antibiotika. Výskyt těchto morfologických forem je velkým tématem v souvislosti s přetrvávajícími obtížemi o řady pacientů, kteří podstoupili řádnou antibiotickou léčbu. Prozatím nebyla potvrzena ani vyvrácena role těchto rozdílných morfologických forem v patogenezi lymeské boreliózy. Zároveň je u řady pacientů s přetrvávajícími obtížemi pozorován výskyt autoprotilátek typických pro myozitidy. Testování přítomnosti těchto protilátek tak bylo dalším tématem této práce.
V praktické části byl testován účinek antibiotik a možnost, že mohou indukovat odlišné morfologické formy Borrelií. Kultury pěstované a antibiotiky byly barveny a pozorovány pod fluorescenčním mikroskopem k určení životnosti bakterií. Kromě toho byla testována séra myší, imunizovaných připravenými vakcínami s jednotlivými morfologickými formami Borrelií, na přítomnost protilátek a autoprotilátek. Výsledky ukázaly, že některá antibiotika mohou způsobovat vznik cystických forem Borrelií. V testovaných sérech byla detekována přítomnost protilátek, které se lišily proti jednotlivým použitým vakcínám. Přítomnost autoprotilátek detekována nebyla. Výsledky této práce tak slouží jako další informace pro následné studie, která budou nutná k objasnění role odlišných morfologických forem Borrelií v patogenezi lymeské boreliózy.
Anotace v angličtině
There are still many questions surrounding the bacteria B. burgdorferi sensu lato, which causes Lyme disease, despite years of research. There is still much uncertainty about the different morphological forms that these bacteria can create, depending on adverse environmental conditions or in response to antibiotics. The occurrence of these morphological forms is a major topic in relation to the persistent difficulties experienced by many patients who have undergone proper antibiotic treatment. The role of these different morphological forms in the pathogenesis of Lyme disease has not yet been confirmed or refuted. At the same time, the presence of autoantibodies typical of myositis has been observed in many patients with persistent symptoms. Therefore, the testing for the presence of these antibodies was another topic of this work.
In the practical part, the effect of antibiotics and the possibility that they may induce different morphological forms of Borrelia were tested. Cultures grown with antibiotics were stained and observed under a fluorescence microscope to determine the viability of the bacteria. Finally, sera from mice immunized with prepared vaccines containing individual morphological forms of Borrelia were tested for the presence of antibodies and autoantibodies. The results showed that some antibiotics can cause the formation of cystic forms of Borrelia. The tested sera showed the presence of antibodies that differed against the individual vaccines used. The presence of autoantibodies was not detected. The results of this work thus serve as additional information for subsequent studies that will be necessary to clarify the role of different morphological forms of Borrelia in the pathogenesis of Lyme disease.
Klíčová slova
Lymeská borelióza, Borrelia burgdorferi, morfologické formy, autoprotilátky specifické pro myozitidu
U bakterií B. burgdorferi sensu lato způsobujících lymeskou boreliózu je i po mnoha letech výzkumu stále mnoho otazníků. Doposud existuje mnoho nejasností ohledně rozdílných morfologických forem, které tyto bakterie mohou vytvářet v závislosti na nepříznivých podmínkách prostředí či v reakci na antibiotika. Výskyt těchto morfologických forem je velkým tématem v souvislosti s přetrvávajícími obtížemi o řady pacientů, kteří podstoupili řádnou antibiotickou léčbu. Prozatím nebyla potvrzena ani vyvrácena role těchto rozdílných morfologických forem v patogenezi lymeské boreliózy. Zároveň je u řady pacientů s přetrvávajícími obtížemi pozorován výskyt autoprotilátek typických pro myozitidy. Testování přítomnosti těchto protilátek tak bylo dalším tématem této práce.
V praktické části byl testován účinek antibiotik a možnost, že mohou indukovat odlišné morfologické formy Borrelií. Kultury pěstované a antibiotiky byly barveny a pozorovány pod fluorescenčním mikroskopem k určení životnosti bakterií. Kromě toho byla testována séra myší, imunizovaných připravenými vakcínami s jednotlivými morfologickými formami Borrelií, na přítomnost protilátek a autoprotilátek. Výsledky ukázaly, že některá antibiotika mohou způsobovat vznik cystických forem Borrelií. V testovaných sérech byla detekována přítomnost protilátek, které se lišily proti jednotlivým použitým vakcínám. Přítomnost autoprotilátek detekována nebyla. Výsledky této práce tak slouží jako další informace pro následné studie, která budou nutná k objasnění role odlišných morfologických forem Borrelií v patogenezi lymeské boreliózy.
Anotace v angličtině
There are still many questions surrounding the bacteria B. burgdorferi sensu lato, which causes Lyme disease, despite years of research. There is still much uncertainty about the different morphological forms that these bacteria can create, depending on adverse environmental conditions or in response to antibiotics. The occurrence of these morphological forms is a major topic in relation to the persistent difficulties experienced by many patients who have undergone proper antibiotic treatment. The role of these different morphological forms in the pathogenesis of Lyme disease has not yet been confirmed or refuted. At the same time, the presence of autoantibodies typical of myositis has been observed in many patients with persistent symptoms. Therefore, the testing for the presence of these antibodies was another topic of this work.
In the practical part, the effect of antibiotics and the possibility that they may induce different morphological forms of Borrelia were tested. Cultures grown with antibiotics were stained and observed under a fluorescence microscope to determine the viability of the bacteria. Finally, sera from mice immunized with prepared vaccines containing individual morphological forms of Borrelia were tested for the presence of antibodies and autoantibodies. The results showed that some antibiotics can cause the formation of cystic forms of Borrelia. The tested sera showed the presence of antibodies that differed against the individual vaccines used. The presence of autoantibodies was not detected. The results of this work thus serve as additional information for subsequent studies that will be necessary to clarify the role of different morphological forms of Borrelia in the pathogenesis of Lyme disease.
Klíčová slova
Lymeská borelióza, Borrelia burgdorferi, morfologické formy, autoprotilátky specifické pro myozitidu
1. Vypracování stručného literárního přehledu na téma morfologické formy B. burgdorferi a faktory ovlivňující jejich indukci.
2. Praktické zvládnutí kultivace bakterií B. burgdorferi, vitálního barvení korboxyfluoresceinem a fluorescenční mikroskopie.
3. Testování vlivu vnějších faktorů na morfologií bakterií a sledování dynamiky změn. Testovány budou změny složení kultivačního média, vystavení změně osmotického tlaku, vliv specifických protilátek, oxidačních činidel a různých antimikrobiálních látek.
Zásady pro vypracování
1. Vypracování stručného literárního přehledu na téma morfologické formy B. burgdorferi a faktory ovlivňující jejich indukci.
2. Praktické zvládnutí kultivace bakterií B. burgdorferi, vitálního barvení korboxyfluoresceinem a fluorescenční mikroskopie.
3. Testování vlivu vnějších faktorů na morfologií bakterií a sledování dynamiky změn. Testovány budou změny složení kultivačního média, vystavení změně osmotického tlaku, vliv specifických protilátek, oxidačních činidel a různých antimikrobiálních látek.
Seznam doporučené literatury
1. Krupka M, Raska M, Belakova J, Horynova M, Novotny R, Weigl E. (2007). Biological aspects of Lyme disease spirochetes: unique bacteria of the Borrelia burgdorferi species group. - Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Republic. 2007
2. Embers M.E. (editor) The Pathogenic Spirochetes: strategies for evasion of host immunity and persistence. Springer, 2012. 265 pp.
3.Samuels D.S., Radolf J.D. (editors) Borrelia: Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis. Caister Academic Press 2010. 550 pp.
4. Krupka M., Rubesova A., Holy O. (2019) Existuje chronická lymeská borelióza?
Seznam doporučené literatury
1. Krupka M, Raska M, Belakova J, Horynova M, Novotny R, Weigl E. (2007). Biological aspects of Lyme disease spirochetes: unique bacteria of the Borrelia burgdorferi species group. - Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Republic. 2007
2. Embers M.E. (editor) The Pathogenic Spirochetes: strategies for evasion of host immunity and persistence. Springer, 2012. 265 pp.
3.Samuels D.S., Radolf J.D. (editors) Borrelia: Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis. Caister Academic Press 2010. 550 pp.
4. Krupka M., Rubesova A., Holy O. (2019) Existuje chronická lymeská borelióza?
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Obhajobu bakalářské práce studentky Nicoly Pomališové zahájil prof. RNDr. Milan Navrátil, CSc. Studentka seznámila komisi s hlavními částmi a výsledky své práce. Následovalo přečtení posudků vedoucího práce Mgr. Michala Křupky Ph.D. a oponentky Mgr. Kristýny Sloupenské.
Studentka pak reagovala na připomínky a dotazy.
Prezentace studentky obsahovala tato témata:
cíle práce
Borrelia burghorferi sensu lato - charakteristika
Lymeská borelioza
Postboreliový syndrom (PTLDS)
design experimentální části práce, LIVE/DEATH Bac Light - bacterial viability kit
mikroskopická charakterizace bakteriálních kultur v prostředí antibiotik
stanovení protilátek v sérech myší imunizovaných pomocí vakcíny, jejich absence
absence produkce autoprotilátek MSA a MAA u imunizovaných myší
V rozpravě byly uvedeny následující připomínky či nastoleny tyto problémy:
formální zpracování obrázků, české popisky
přímé a nepříme značení: princip metody a jejich srovnání
výskyt bakterií Borrelia sp. v klíšteti, výskyt směsných infekce a její příčiny
cystická forma - jejich výskyt, výhodnost
Studentka na dotazy položené oponentkou práce a členy komise reagovala xxxxx