Informace o kvalifikační práci Štúdium vplyvu šafranu siateho (Crocus sativus L.) na životaschopnosť nádorových buniek a ich schopnosť odpovedi na poškodenie DNA
Nádorové ochorenia sú pretrvávajúcim celosvetovým problémom s vysokou úmrtnosťou a nedostačujúcou liečbou. Okrem klasických, stále nezastupiteľných konvenčných metód liečby (chemoterapia, ožarovanie) sa výskum zaujíma aj o prírodné látky, ktoré môžu pôsobiť prevenčne voči nádorovým ochoreniam. Zaujímavé je tiež štúdium účinku prírodných látok v kombinácií s konvenčnými metódami. Príkladom práve takýchto látok sú koreniny, pod ktoré spadá aj šafran siaty (Crocus sativus L.). Témou bakalárskej práce je štúdium vplyvu celkového extraktu šafranu na životaschopnosť nádorovej línie HCT116 WT a overenie, či môže šafran zvýšiť citlivosť tejto línie k ionizujúcemu žiareniu alebo práve naopak, vykazovať ochranné účinky. Teoretická časť obsahuje zhrnutie všeobecných poznatkov o šafrane a mechanizmoch pôsobenia extraktu šafranu a jeho zložiek na životaschopnosť rôznych nádorových línií. Zahrnutá je taktiež problematika poškodenia DNA ionizujúcim žiarením (IR), mechanizmy opravy dvojvláknových zlomov DNA, regulácia kontrolných bodov bunkového cyklu a signálnych dráh vedúcich k oprave poškodenej DNA alebo bunkovej smrti. Experimentálna časť práce je zameraná na štúdium vplyvu celkového extraktu šafranu na životaschopnosť nádorovej línie HCT116 WT bez, a spolu s pôsobením IR. Po ošetrení buniek extraktom šafranu a následnom vystavení IR bola pomocou prietokovej cytometrie sledovaná distribúcia buniek v bunkovom cykle, hlavne prítomnosť sub-G1 populácie. Pomocou Western blotu v kombinácií s imunologickou detekciou bolo sledované, či ošetrenie šafranom vyvoláva aktiváciu proteínov regulujúcich odpoveď bunky na poškodenie DNA a taktiež aktiváciu kontrolných bodov bunkového cyklu. Imunofluorescenčné farbenie ukazovateľov poškodenia DNA ako je yH2AX, 53BP1 a BRCA1 v spojení s priamou mikroskopiou umožnilo overiť aktiváciu proteínov bunkovej odpovedi na poškodenie DNA vyvolanej pomocou IR. Výsledky tejto práce naznačujú, že ošetrenie buniek celkovým extraktom šafranu znižuje proliferáciu nádorovej línie HCT116 WT, predlžuje S fázu a mierne zvyšuje G2 fázu bunkového cyklu. Imunodetekciou pro-apoptických proteínov a proteínov odpovedajúcich na poškodenie DNA bol dokázaný vplyv šafranu na životaschopnosť bunkovej línie HCT116 WT a pokles schopnosti aktivácie proteínov podieľajúcich sa na regulácií schopnosti bunkovej odpovedi na DNA poškodenie po vystavení IR. Zároveň bol v kombinácií s IR pozorovaný senzitivizujúci vplyv extraktu šafranu na nádorovú líniu HCT116 WT. Na základe získaných dát sa môžeme domnievať, že celkový extrakt šafranu má mierny cytotoxický a senzitivizujúci vplyv na nádorovú líniu HCT116 WT, ktorý by mohol byť zosilnený spolu s použitím IR, čo bude predmetom ďalšieho štúdia.
Anotace v angličtině
Tumor diseases are a global persistent problem with high mortality and insufficient treatment. Aside from classical, still not replaceable conventional methods of treatment (chemotherapy, irradiation), research has begun to look for alternatives such as natural substances, that can act as preventive agents against cancer. Interesting is also the study of effect of natural substances in combination with conventional methods of treatment. An example of such substances are spices, which also include saffron (Crocus sativus, L.) The aim of this bachelor thesis is to study the effect of the total extract of saffron on the viability of HCT116 WT tumor cell line and to verify that saffron can increase the sensitivity of this line to ionizing radiation or, on the contrary, prove the protective attributes of saffron. The theoretical part summarizes the general knowledge of saffron and the mechanisms of action of saffron extract and its components, on the viability of various tumor cell lines. Covered are also DNA damage by ionizing radiation (IR) repair mechanisms for double-stranded DNA breaks, regulation of cell cycle checkpoints and signaling pathways leading to repair of damaged DNA or cell death. The experimental part is a study of the effect of the total extract of saffron on the viability of HCT116 WT tumor cell line without, and with IR. After treatment of the cells with saffron extract and subsequent IR exposure, cell distribution was monitored by flow cytometry with emphasis on presence of sub-G1 population. Using Western blot in combination with immunological detection proved to be a valuable tool in examining whether saffron treatment induced activation of the cell-responsive proteins to DNA damage and activation of cell cycle checkpoints. Immunofluorescence staining of DNA damage markers such as yH2AX, 53BP1 and BRCA1 followed by direct microscopy allowed verification of activation of cellular response proteins to IR-induced DNA damage. The results of this work demonstrate that treatment of cells with complete extract of saffron decreases proliferation of tumor cell line HCT116 WT, prolongs S phase and slightly increases G2 phase of cell cycle. With help of immunodetection of pro-apoptotic proteins and DNA damage response proteins an effect of saffron was proved on cell viability HCT116 WT tumor cell line and decrease of ability to activate proteins regulating cell response to DNA damage after exposure to IR. Furthermore, we have observed that saffron extract has sensitizing effect on HCT116 WT tumor cell line to IR. On the basis of acquired data we are suggesting that complete extract of saffron has mild cytotoxic and sensitizing effect on tumor cell line HCT116 WT and could be increased in combination with IR, which is a subject of further studies.
Klíčová slova
šafran, nádorová línia HCT116 WT, krocín, Western blot, ionizujúce žiarenie, oprava DNA
Klíčová slova v angličtině
saffron, tumor cell line HCT116 WT, crocin, Western blot, ionizing radiation, repair of DNA damage
Rozsah průvodní práce
65 s. (106 000 znakov)
Jazyk
SK
Anotace
Nádorové ochorenia sú pretrvávajúcim celosvetovým problémom s vysokou úmrtnosťou a nedostačujúcou liečbou. Okrem klasických, stále nezastupiteľných konvenčných metód liečby (chemoterapia, ožarovanie) sa výskum zaujíma aj o prírodné látky, ktoré môžu pôsobiť prevenčne voči nádorovým ochoreniam. Zaujímavé je tiež štúdium účinku prírodných látok v kombinácií s konvenčnými metódami. Príkladom práve takýchto látok sú koreniny, pod ktoré spadá aj šafran siaty (Crocus sativus L.). Témou bakalárskej práce je štúdium vplyvu celkového extraktu šafranu na životaschopnosť nádorovej línie HCT116 WT a overenie, či môže šafran zvýšiť citlivosť tejto línie k ionizujúcemu žiareniu alebo práve naopak, vykazovať ochranné účinky. Teoretická časť obsahuje zhrnutie všeobecných poznatkov o šafrane a mechanizmoch pôsobenia extraktu šafranu a jeho zložiek na životaschopnosť rôznych nádorových línií. Zahrnutá je taktiež problematika poškodenia DNA ionizujúcim žiarením (IR), mechanizmy opravy dvojvláknových zlomov DNA, regulácia kontrolných bodov bunkového cyklu a signálnych dráh vedúcich k oprave poškodenej DNA alebo bunkovej smrti. Experimentálna časť práce je zameraná na štúdium vplyvu celkového extraktu šafranu na životaschopnosť nádorovej línie HCT116 WT bez, a spolu s pôsobením IR. Po ošetrení buniek extraktom šafranu a následnom vystavení IR bola pomocou prietokovej cytometrie sledovaná distribúcia buniek v bunkovom cykle, hlavne prítomnosť sub-G1 populácie. Pomocou Western blotu v kombinácií s imunologickou detekciou bolo sledované, či ošetrenie šafranom vyvoláva aktiváciu proteínov regulujúcich odpoveď bunky na poškodenie DNA a taktiež aktiváciu kontrolných bodov bunkového cyklu. Imunofluorescenčné farbenie ukazovateľov poškodenia DNA ako je yH2AX, 53BP1 a BRCA1 v spojení s priamou mikroskopiou umožnilo overiť aktiváciu proteínov bunkovej odpovedi na poškodenie DNA vyvolanej pomocou IR. Výsledky tejto práce naznačujú, že ošetrenie buniek celkovým extraktom šafranu znižuje proliferáciu nádorovej línie HCT116 WT, predlžuje S fázu a mierne zvyšuje G2 fázu bunkového cyklu. Imunodetekciou pro-apoptických proteínov a proteínov odpovedajúcich na poškodenie DNA bol dokázaný vplyv šafranu na životaschopnosť bunkovej línie HCT116 WT a pokles schopnosti aktivácie proteínov podieľajúcich sa na regulácií schopnosti bunkovej odpovedi na DNA poškodenie po vystavení IR. Zároveň bol v kombinácií s IR pozorovaný senzitivizujúci vplyv extraktu šafranu na nádorovú líniu HCT116 WT. Na základe získaných dát sa môžeme domnievať, že celkový extrakt šafranu má mierny cytotoxický a senzitivizujúci vplyv na nádorovú líniu HCT116 WT, ktorý by mohol byť zosilnený spolu s použitím IR, čo bude predmetom ďalšieho štúdia.
Anotace v angličtině
Tumor diseases are a global persistent problem with high mortality and insufficient treatment. Aside from classical, still not replaceable conventional methods of treatment (chemotherapy, irradiation), research has begun to look for alternatives such as natural substances, that can act as preventive agents against cancer. Interesting is also the study of effect of natural substances in combination with conventional methods of treatment. An example of such substances are spices, which also include saffron (Crocus sativus, L.) The aim of this bachelor thesis is to study the effect of the total extract of saffron on the viability of HCT116 WT tumor cell line and to verify that saffron can increase the sensitivity of this line to ionizing radiation or, on the contrary, prove the protective attributes of saffron. The theoretical part summarizes the general knowledge of saffron and the mechanisms of action of saffron extract and its components, on the viability of various tumor cell lines. Covered are also DNA damage by ionizing radiation (IR) repair mechanisms for double-stranded DNA breaks, regulation of cell cycle checkpoints and signaling pathways leading to repair of damaged DNA or cell death. The experimental part is a study of the effect of the total extract of saffron on the viability of HCT116 WT tumor cell line without, and with IR. After treatment of the cells with saffron extract and subsequent IR exposure, cell distribution was monitored by flow cytometry with emphasis on presence of sub-G1 population. Using Western blot in combination with immunological detection proved to be a valuable tool in examining whether saffron treatment induced activation of the cell-responsive proteins to DNA damage and activation of cell cycle checkpoints. Immunofluorescence staining of DNA damage markers such as yH2AX, 53BP1 and BRCA1 followed by direct microscopy allowed verification of activation of cellular response proteins to IR-induced DNA damage. The results of this work demonstrate that treatment of cells with complete extract of saffron decreases proliferation of tumor cell line HCT116 WT, prolongs S phase and slightly increases G2 phase of cell cycle. With help of immunodetection of pro-apoptotic proteins and DNA damage response proteins an effect of saffron was proved on cell viability HCT116 WT tumor cell line and decrease of ability to activate proteins regulating cell response to DNA damage after exposure to IR. Furthermore, we have observed that saffron extract has sensitizing effect on HCT116 WT tumor cell line to IR. On the basis of acquired data we are suggesting that complete extract of saffron has mild cytotoxic and sensitizing effect on tumor cell line HCT116 WT and could be increased in combination with IR, which is a subject of further studies.
Klíčová slova
šafran, nádorová línia HCT116 WT, krocín, Western blot, ionizujúce žiarenie, oprava DNA
Klíčová slova v angličtině
saffron, tumor cell line HCT116 WT, crocin, Western blot, ionizing radiation, repair of DNA damage
Zásady pro vypracování
Bakalárska práca bude vypracovaná v súlade s pokynmi pre spracovanie bakalárskej práce platnými pre katedru biochémie, obor Biotechnologie a genové inženýrství.
V teoretickej časti bakalárskej práce bude spracovaná literárna rešerš, ktorá zhŕňa súčasný stav riešenej problematiky. Stručne budú rozobrané a vysvetlené známe účinky extraktu šafranu, ale aj jeho jednotlivých zložiek, na životaschopnosť rôznych nádorových línií. Na základe kritického zhodnotenia súčasnej literatúry bude objasnený význam témy bakalárskej práce, a to štúdium možnosti vplyvu celkového extraktu šafranu na životaschopnosť nádorových buniek, a to predovšetkým jeho možnosť ovplyvniť schopnosť opravy DNA poškodenia spôsobeného ionizujúcim žiarením. Zhrnutá bude problematika opravných dráh DNA poškodenia ionizujúcim žiarením (IR), mechanizmy opravy dvojvláknových zlomov DNA a následný vplyv na aktiváciu kontrolných bodov bunkového cyklu, opravu DNA poškodenia prípadne aktiváciu mechanizmov spôsobujúcich bunkovú smrť.
V experimentálnej časti bude metódami fluorescenčnej prietokovej cytometrie (FACS) a western blotom (WB) overený cytotoxický - proapoptický efekt celkového extraktu šafranu na rôzne nádorové línie bez, i spolu s pôsobením IR. Pomocou WB bude sledovaná aktivácia dráh programovanej bunkovej smrti, kontrolných bodov bunkového cyklu a proteínov podieľajúcich sa na oprave poškodenej DNA. Štúdium vplyvu extraktu šafranu na opravné mechanizmy DNA u buniek vystavených IR bude doplnené o detekciu proteínov aktivácie opravných dráh DNA pomocou imunofluorescenčnej mikroskopie.
Výstupom práce bude zistenie, či nami pripravené celkové extrakty šafranu disponujú cytotoxickými účinkami na vybrané nádorové bunkové línie a taktiež overenie prípadného vplyvu šafranu na kontrolné body bunkového cyklu a mechanizmy opravy DNA poškodenia vyvolaného pomocou IR.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Práce bude odevzdána na sekretariátě Oddělení buněčné biologie CRH ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce, a to v řádném termínu uvedeném v harmonogramu na webové stránce Katedry biochemie.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Zásady pro vypracování
Bakalárska práca bude vypracovaná v súlade s pokynmi pre spracovanie bakalárskej práce platnými pre katedru biochémie, obor Biotechnologie a genové inženýrství.
V teoretickej časti bakalárskej práce bude spracovaná literárna rešerš, ktorá zhŕňa súčasný stav riešenej problematiky. Stručne budú rozobrané a vysvetlené známe účinky extraktu šafranu, ale aj jeho jednotlivých zložiek, na životaschopnosť rôznych nádorových línií. Na základe kritického zhodnotenia súčasnej literatúry bude objasnený význam témy bakalárskej práce, a to štúdium možnosti vplyvu celkového extraktu šafranu na životaschopnosť nádorových buniek, a to predovšetkým jeho možnosť ovplyvniť schopnosť opravy DNA poškodenia spôsobeného ionizujúcim žiarením. Zhrnutá bude problematika opravných dráh DNA poškodenia ionizujúcim žiarením (IR), mechanizmy opravy dvojvláknových zlomov DNA a následný vplyv na aktiváciu kontrolných bodov bunkového cyklu, opravu DNA poškodenia prípadne aktiváciu mechanizmov spôsobujúcich bunkovú smrť.
V experimentálnej časti bude metódami fluorescenčnej prietokovej cytometrie (FACS) a western blotom (WB) overený cytotoxický - proapoptický efekt celkového extraktu šafranu na rôzne nádorové línie bez, i spolu s pôsobením IR. Pomocou WB bude sledovaná aktivácia dráh programovanej bunkovej smrti, kontrolných bodov bunkového cyklu a proteínov podieľajúcich sa na oprave poškodenej DNA. Štúdium vplyvu extraktu šafranu na opravné mechanizmy DNA u buniek vystavených IR bude doplnené o detekciu proteínov aktivácie opravných dráh DNA pomocou imunofluorescenčnej mikroskopie.
Výstupom práce bude zistenie, či nami pripravené celkové extrakty šafranu disponujú cytotoxickými účinkami na vybrané nádorové bunkové línie a taktiež overenie prípadného vplyvu šafranu na kontrolné body bunkového cyklu a mechanizmy opravy DNA poškodenia vyvolaného pomocou IR.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Práce bude odevzdána na sekretariátě Oddělení buněčné biologie CRH ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce, a to v řádném termínu uvedeném v harmonogramu na webové stránce Katedry biochemie.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Seznam doporučené literatury
Abdullaev F. I., Espinosa-Auguirre J. J. (2004): Biomedical properties of saffron and its potential use in cancer therapy and chemoprevention trials. Cancer Detection Prevention 28, 426-432.
Amin A., Bajbou K., Koch A., Gandesiri M., Schneider-Stock R. (2015): Defective autophagosome formation in p53-null colorectal cancer reinforces crocin-induced apoptosis. International journal of molecular sciences 16, 1544-1561.
Bajbouj K., Schulze-Luehrmann J., Diermeier S., Amin A., Schneider-Stock R. (2012): The anticancer effect of saffron in two p53isogenic colorectal cancer cell lines. BMC Complementary and Alternative Medicine 12, 2-9.
Boskabady M. H., Farkhondeh T. (2016): Anti-inflammatory, antioxidant, and immunomodulatory effects of Crocus sativus L. and its main constituents. Phytotherapy Research 30, 1072-1094.
Ciccia A., Elledge S. J. (2010): The DNA damage response: Making it safe to play with knives. Molecular Cell 40, 179-204.
Escribano J., Alonso G. L., Coca-Prados M., Fernández J. A. (1996): Crocin, safranal and picrocrocin from saffron (Crocus sativus L.) inhibit the growth of human cancer cells in vitro. Cancer Letters 100, 23-30.
Koul A., Abraham S. K. (2017): Intake of saffron reduces y-radiation-induced genotoxicity and oxidative stress in mice. Toxicology mechanisms and methods 6, 428-434.
Koul A., Abraham S. K. (2018): Efficiency of crocin and safranal as protective agents against genotoxic stress induced by gamma radiation, urethane, and procarbazine in mice. Human and experimental toxicology 37, 13-20.
Lu P., Lin H., Gu Y., Li L., Guo H., Wang F., Qiu X. (2015): Antitumor effects of crocin on human breast cancer cells. International Journal of Clinical and Experimental Medicine 8, 20316-20322.
Melnyk J. P., Wang S., Marcone M. F. (2010): Chemical and biological properties of the world's most expensive spice: Saffron. Food Research International 43, 1981-1989.
Patel S., Sarwat M., Khan T. H. (2017): Mechanism behind the anti-tumor potential of saffron (Crocus sativus L.): The molecular perspective. Critical Reviews in Oncology/Hematology 115, 27-35.
Samarghandian S., Borji A. (2014): Anticarcinogenic effect of saffron (Crocus Sativus L.) and its ingredients. Pharmacognosy Research 6, 99-107.
Tavakkol-Afshari J., Brook A., Mousavi S. H. (2008): Study of cytotoxic and apoptogenic properties of saffron extract in human cancer cell lines. Food and Chemical Toxicology 46, 3443-3447.
Vazifedan V., Mousavi S. H., Sargolzaei J., Soleymanifard S., Pakdel A. F. (2017): Study of crocin and radiotherapy-induced cytotoxicity and apoptosis in the Head and Neck cancer (HN-5) cell line. Iranian Journal of Pharmaceutical Research 16, 260-237.
Seznam doporučené literatury
Abdullaev F. I., Espinosa-Auguirre J. J. (2004): Biomedical properties of saffron and its potential use in cancer therapy and chemoprevention trials. Cancer Detection Prevention 28, 426-432.
Amin A., Bajbou K., Koch A., Gandesiri M., Schneider-Stock R. (2015): Defective autophagosome formation in p53-null colorectal cancer reinforces crocin-induced apoptosis. International journal of molecular sciences 16, 1544-1561.
Bajbouj K., Schulze-Luehrmann J., Diermeier S., Amin A., Schneider-Stock R. (2012): The anticancer effect of saffron in two p53isogenic colorectal cancer cell lines. BMC Complementary and Alternative Medicine 12, 2-9.
Boskabady M. H., Farkhondeh T. (2016): Anti-inflammatory, antioxidant, and immunomodulatory effects of Crocus sativus L. and its main constituents. Phytotherapy Research 30, 1072-1094.
Ciccia A., Elledge S. J. (2010): The DNA damage response: Making it safe to play with knives. Molecular Cell 40, 179-204.
Escribano J., Alonso G. L., Coca-Prados M., Fernández J. A. (1996): Crocin, safranal and picrocrocin from saffron (Crocus sativus L.) inhibit the growth of human cancer cells in vitro. Cancer Letters 100, 23-30.
Koul A., Abraham S. K. (2017): Intake of saffron reduces y-radiation-induced genotoxicity and oxidative stress in mice. Toxicology mechanisms and methods 6, 428-434.
Koul A., Abraham S. K. (2018): Efficiency of crocin and safranal as protective agents against genotoxic stress induced by gamma radiation, urethane, and procarbazine in mice. Human and experimental toxicology 37, 13-20.
Lu P., Lin H., Gu Y., Li L., Guo H., Wang F., Qiu X. (2015): Antitumor effects of crocin on human breast cancer cells. International Journal of Clinical and Experimental Medicine 8, 20316-20322.
Melnyk J. P., Wang S., Marcone M. F. (2010): Chemical and biological properties of the world's most expensive spice: Saffron. Food Research International 43, 1981-1989.
Patel S., Sarwat M., Khan T. H. (2017): Mechanism behind the anti-tumor potential of saffron (Crocus sativus L.): The molecular perspective. Critical Reviews in Oncology/Hematology 115, 27-35.
Samarghandian S., Borji A. (2014): Anticarcinogenic effect of saffron (Crocus Sativus L.) and its ingredients. Pharmacognosy Research 6, 99-107.
Tavakkol-Afshari J., Brook A., Mousavi S. H. (2008): Study of cytotoxic and apoptogenic properties of saffron extract in human cancer cell lines. Food and Chemical Toxicology 46, 3443-3447.
Vazifedan V., Mousavi S. H., Sargolzaei J., Soleymanifard S., Pakdel A. F. (2017): Study of crocin and radiotherapy-induced cytotoxicity and apoptosis in the Head and Neck cancer (HN-5) cell line. Iranian Journal of Pharmaceutical Research 16, 260-237.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Průběh obhajoby:
V úvodu obhajoby předseda komise prof. RNDr. Jozef Šamaj, Dr.Sc. představil studenta přítomným akademickým pracovníkům a hostům. V rámci prezentace své práce student seznámil všechny zúčastněné s cíli práce a hlavními metodami využitými při jejím zpracování, dále se získanými výsledky a z nich vyplývajícími závěry.
Následně byl přečten oponentní posudek. Odpovědi na otázky a připomínky uvedené v posudku oponenta a vedoucího bakalářské práce student zodpověděl uspokojivě, doložil je vypracované v písemné formě a prezentoval také ústně.
V rámci veřejné diskuse zodpověděla následující dotazy položené přítomnými odborníky:
Dr. Krasylenko: Proč byl zvolen tento typ extraktu ze šafránu (vodní extrakt), protože etanolové a metanolové extrakty by měly být efektivnější? Je znám geografický zdroj šafránu použitého k experimentům?
Doc. Komis: Jsou známy proteiny nebo buněčné procesy, které jsou specificky ovlivněny aktivními složkami extraktu ze šafránu? Jakou roli hraje aktivace a fosforylace p53 proteinu po ovlivnění extraktem šafránu? Jaký typ iradiace byl použit?
Prof. Šamaj: Vysvětlete, jaké struktury byly detekovány v jádrech pomocí imunofluorescenční mikroskopie?
Doc. Takáč: Z jakého důvodu vykazuje detekce BAX proteinů pomocí Wester Blotu dva proužky, který byl studován blíže a zda byly použity kvantitativní metody na stanovení obsahu?