Teoretická část diplomové práce se zabývá multiformním glioblastomem, nejagresivnějším subtypem maligních nádorů centrální nervové soustavy. Cirkulující nádorové buňky jsou buňky primárního tumoru uvolněné do periferní krve ve snaze opustit hypoxické a nekrotické prostředí tumoru. Jejich detekce je nepříznivým faktorem s potenciálem založení vzdálených metastáz, které se vyskytující častěji, než je obecně předpokládáno.
Cílem praktické části diplomové práce je optimalizace stabilizace krevních vzorků a validace detekce cirkulujících nádorových buněk metodou přímé detekce systémem CytoTrack CT11TM. Z odběrových zkumavek CellSave, Streck a běžných zkumavek s obsahem solí kyseliny ethylendiamintetraoctové byla na základě analýzy viability buněk a DNA vybrána zkumavka Streck s nejdelší garancí stabilizace vzorku.
Samotná platforma CytoTrack CT11TM byla validována nejdříve na buněčné linii U87-MG a poté využita k analýze pacientských vzorků s použitím markerů GFAP a vimentinu exprimovanými cirkulujícími nádorovými buňkami. U jednoho ze sedmi pacientských vzorků byl detekován klastr a samostatná cirkulující nádorová buňka.
Anotace v angličtině
The theoretical part of the diploma thesis deals with the glioblastoma multiforme disease, the most aggressive subtype of malignant tumors of the central nervous system. Circulating tumor cells are primary tumor cells released into the peripheral blood in an effort to leave the hypoxic and necrotic environment of the tumor. Their detection is an unfavorable factor with a potential to establish distant metastases that occur more frequently than it is generally thought.
The aim of the experimental part of the diploma thesis is to optimize the stabilization of blood samples and to validate the method of direct detection of circulating tumor cells by the CytoTrack CT11TM system. Based on the cell viability and DNA stability analysis, The Streck tube with the longest guarantee of sample stabilization was selected from CellSave, Streck and conventional tubes containing ethylenediaminetetraacetic acid salts.
The CytoTrack CT11TM platform was first validated on the U87-MG cell line and then used for analyses of the patient samples using GFAP and vimentin markers. A cluster and a single circulating tumor cell were detected in one of the seven patient samples.
Teoretická část diplomové práce se zabývá multiformním glioblastomem, nejagresivnějším subtypem maligních nádorů centrální nervové soustavy. Cirkulující nádorové buňky jsou buňky primárního tumoru uvolněné do periferní krve ve snaze opustit hypoxické a nekrotické prostředí tumoru. Jejich detekce je nepříznivým faktorem s potenciálem založení vzdálených metastáz, které se vyskytující častěji, než je obecně předpokládáno.
Cílem praktické části diplomové práce je optimalizace stabilizace krevních vzorků a validace detekce cirkulujících nádorových buněk metodou přímé detekce systémem CytoTrack CT11TM. Z odběrových zkumavek CellSave, Streck a běžných zkumavek s obsahem solí kyseliny ethylendiamintetraoctové byla na základě analýzy viability buněk a DNA vybrána zkumavka Streck s nejdelší garancí stabilizace vzorku.
Samotná platforma CytoTrack CT11TM byla validována nejdříve na buněčné linii U87-MG a poté využita k analýze pacientských vzorků s použitím markerů GFAP a vimentinu exprimovanými cirkulujícími nádorovými buňkami. U jednoho ze sedmi pacientských vzorků byl detekován klastr a samostatná cirkulující nádorová buňka.
Anotace v angličtině
The theoretical part of the diploma thesis deals with the glioblastoma multiforme disease, the most aggressive subtype of malignant tumors of the central nervous system. Circulating tumor cells are primary tumor cells released into the peripheral blood in an effort to leave the hypoxic and necrotic environment of the tumor. Their detection is an unfavorable factor with a potential to establish distant metastases that occur more frequently than it is generally thought.
The aim of the experimental part of the diploma thesis is to optimize the stabilization of blood samples and to validate the method of direct detection of circulating tumor cells by the CytoTrack CT11TM system. Based on the cell viability and DNA stability analysis, The Streck tube with the longest guarantee of sample stabilization was selected from CellSave, Streck and conventional tubes containing ethylenediaminetetraacetic acid salts.
The CytoTrack CT11TM platform was first validated on the U87-MG cell line and then used for analyses of the patient samples using GFAP and vimentin markers. A cluster and a single circulating tumor cell were detected in one of the seven patient samples.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Vzhledem k nouzovému stavu platnému v době odevzdání závěrečných prací ve školním roce 2019/2020 je student povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Dva svázané výtisky obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce student odevzdá přímo zkušební komisy v den obhajoby.
Zorientovat se v problematice detekce cirkulujících nádorových buněk, získat teoretické a praktické znalosti technologie přímé detekce s využitím CytoTrack CT11 systému, naučit se pracovat s patřičnými databázemi a softwarem.
Provést selekci dostupných odběrových zkumavek a jejich validaci pro zabezpečení viability buněčných element v krevním vzorku během transportu z místa odběru k analýze.
V rámci proof-of-concept studie zoptimalizovat detekci nádorových buněk v periferní krvi u pacientů s multiformním glioblastomem.
Zásady pro vypracování
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Vzhledem k nouzovému stavu platnému v době odevzdání závěrečných prací ve školním roce 2019/2020 je student povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Dva svázané výtisky obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce student odevzdá přímo zkušební komisy v den obhajoby.
Zorientovat se v problematice detekce cirkulujících nádorových buněk, získat teoretické a praktické znalosti technologie přímé detekce s využitím CytoTrack CT11 systému, naučit se pracovat s patřičnými databázemi a softwarem.
Provést selekci dostupných odběrových zkumavek a jejich validaci pro zabezpečení viability buněčných element v krevním vzorku během transportu z místa odběru k analýze.
V rámci proof-of-concept studie zoptimalizovat detekci nádorových buněk v periferní krvi u pacientů s multiformním glioblastomem.
Seznam doporučené literatury
1. Hilling T., Horn P., Nygaard A.B., et al. In vitro detection of circulating tumor cells compared by the CytoTrack and CellSearch methods. Tumour Biol. 2015 Jun;36(6):4597-601. 2. Lombard A., Goffart N., Rogister B. Glioblastoma Circulating Cells: Reality, Trap or Illusion? Stem Cells Int. 2015;2015:182985. doi: 10.1155/2015/182985. Epub 2015 May 20. 3. Cote, Richard J., Datar, Ram H. Circulating Tumor Cells. 2016, 75-97.
Seznam doporučené literatury
1. Hilling T., Horn P., Nygaard A.B., et al. In vitro detection of circulating tumor cells compared by the CytoTrack and CellSearch methods. Tumour Biol. 2015 Jun;36(6):4597-601. 2. Lombard A., Goffart N., Rogister B. Glioblastoma Circulating Cells: Reality, Trap or Illusion? Stem Cells Int. 2015;2015:182985. doi: 10.1155/2015/182985. Epub 2015 May 20. 3. Cote, Richard J., Datar, Ram H. Circulating Tumor Cells. 2016, 75-97.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
V úvodu obhajoby předsedkyně komise doc. RNDr. Lenka Luhová, Ph.D. představila studenta přítomným akademickým pracovníkům a hostům. V rámci prezentace své práce Validace metody přímé detekce cirkulujících nádorových buněk u pacientů s multiformním glioblastomem student seznámil všechny zúčastněné s cíli práce a hlavními metodami využitými při jejím zpracování, dále se získanými výsledky a z nich vyplývajícími závěry.
Následně byl přečten posudek vedoucího práce a oponentský posudek. Student zodpověděl dotazy položené v posudku oponenta. Odpověděl také na dotazy členů zkušební komise:
dr. Mária Škrabišová: Proč je tak důležitá agregace pozorovaných tumorových buněk?