Záujmový jačmenný gén Hvabc1 je ortológ génu Atwbc19, ktorý v nadexpresii udeľuje transgénnemu tabaku rezistenciu voči antibiotiku kanamycínu. Transformáciou génu Hvabc1 do tabaku bude overená jeho funkcia. Realizáciou navrhnutej klonovacej stratégie bol pripravený expresný vektor obsahujúci záujmový gén Hvabc1. Expresný vektor pCBA::Hvabc1 bol transformovaný do baktérií Agrobacterium tumefaciens. Modifikované baktérie boli použité na transformáciu tabaku (Nicotiana tabacum L., cv. Xanthi). Transformované explantáty a regenerované rastliny boli selektované na médiu s obsahom antibiotika kanamycínu. Tranzientnou transformáciou tabaku bola potvrdená správnosť pripraveného konštruktu.
Anotace v angličtině
The barley gene of interest, Hvabc1, is orthologous to the gene Atwbc19, which when overexpressed, confers resistance to antibiotic kanamycin in transgenic tobacco. The function of Hvabc1 gene will be determined by transformation into tobacco. The proposed cloning strategy was carried out and expression vector containing the gene of interest Hvabc1, was prepared as a result. The expression vector pCBA::Hvabc1 was transformed into bacteria Agrobacterium tumefaciens. Modified bacteria were used for tobacco (Nicotiana tabacum L., cv. Xanthi) transformation. Transformed explants and regenerated plants underwent a selection process on a medium containing an antibiotic kanamycin. Transient transformation confirmed that the prepared construct was functional.
Klíčová slova
transformácia, tabak, A. tumefaciens, Atwbc19
Klíčová slova v angličtině
transformation, tobacco, A. tumefaciens, Atwbc19
Rozsah průvodní práce
54
Jazyk
SK
Anotace
Záujmový jačmenný gén Hvabc1 je ortológ génu Atwbc19, ktorý v nadexpresii udeľuje transgénnemu tabaku rezistenciu voči antibiotiku kanamycínu. Transformáciou génu Hvabc1 do tabaku bude overená jeho funkcia. Realizáciou navrhnutej klonovacej stratégie bol pripravený expresný vektor obsahujúci záujmový gén Hvabc1. Expresný vektor pCBA::Hvabc1 bol transformovaný do baktérií Agrobacterium tumefaciens. Modifikované baktérie boli použité na transformáciu tabaku (Nicotiana tabacum L., cv. Xanthi). Transformované explantáty a regenerované rastliny boli selektované na médiu s obsahom antibiotika kanamycínu. Tranzientnou transformáciou tabaku bola potvrdená správnosť pripraveného konštruktu.
Anotace v angličtině
The barley gene of interest, Hvabc1, is orthologous to the gene Atwbc19, which when overexpressed, confers resistance to antibiotic kanamycin in transgenic tobacco. The function of Hvabc1 gene will be determined by transformation into tobacco. The proposed cloning strategy was carried out and expression vector containing the gene of interest Hvabc1, was prepared as a result. The expression vector pCBA::Hvabc1 was transformed into bacteria Agrobacterium tumefaciens. Modified bacteria were used for tobacco (Nicotiana tabacum L., cv. Xanthi) transformation. Transformed explants and regenerated plants underwent a selection process on a medium containing an antibiotic kanamycin. Transient transformation confirmed that the prepared construct was functional.
Klíčová slova
transformácia, tabak, A. tumefaciens, Atwbc19
Klíčová slova v angličtině
transformation, tobacco, A. tumefaciens, Atwbc19
Zásady pro vypracování
Vypracovat literární rešerši na téma bakalářské práce. Realizace navržené klonovací strategie. Ověřit správnost připraveného konstruktu včetně zájmového genu. Provést transformaci expresního vektoru do Agrobacterium tumefaciens a ověřit správnost vnesení. Příprava rostlin tabáku pro transformaci, výsev semen akultivace rostlin v in vitro podmínkách. Provedení transformace, selekce transformovaných pletiv. Vyhodnocení procesu selekce a transformace.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Práce bude odevzdána na sekretariátě Oddělení buněčné biologie CRH ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce, a to v řádném termínu uvedeném v harmonogramu na webové stránce Katedry biochemie.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Zásady pro vypracování
Vypracovat literární rešerši na téma bakalářské práce. Realizace navržené klonovací strategie. Ověřit správnost připraveného konstruktu včetně zájmového genu. Provést transformaci expresního vektoru do Agrobacterium tumefaciens a ověřit správnost vnesení. Příprava rostlin tabáku pro transformaci, výsev semen akultivace rostlin v in vitro podmínkách. Provedení transformace, selekce transformovaných pletiv. Vyhodnocení procesu selekce a transformace.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Práce bude odevzdána na sekretariátě Oddělení buněčné biologie CRH ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce, a to v řádném termínu uvedeném v harmonogramu na webové stránce Katedry biochemie.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Seznam doporučené literatury
Stewart C.N. Jr., Touraev A., Citovsky V., Tzfira T. (Eds). Plant Transformation Technologies. Wiley-Blackwell Scientific Publishing, Ames Iowa, 2011.
Sambrook J., Rusell D.W.: Molecular cloning: A laboratory manual (3rd edition). Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA, 2001.
Altman A.,. Hasegawa P.M.: Plant Biotechnology and Agriculture. Elsevier, 2012.
Ondřej M., Drobník J.: Transgenose rostlin. Akademia, 2002.
Mentewab A., Stewart C.N.: Overexpression of an Arabidopsis thaliana ABC transporter confers kanamycin resistance to transgenic plants. Nat Biotech 23:11771180, 2005.
Gynheung A.: High efficiency transformation of cultred tabacco cells. Plant Physiol 79, 568-570, 1985.
Seznam doporučené literatury
Stewart C.N. Jr., Touraev A., Citovsky V., Tzfira T. (Eds). Plant Transformation Technologies. Wiley-Blackwell Scientific Publishing, Ames Iowa, 2011.
Sambrook J., Rusell D.W.: Molecular cloning: A laboratory manual (3rd edition). Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA, 2001.
Altman A.,. Hasegawa P.M.: Plant Biotechnology and Agriculture. Elsevier, 2012.
Ondřej M., Drobník J.: Transgenose rostlin. Akademia, 2002.
Mentewab A., Stewart C.N.: Overexpression of an Arabidopsis thaliana ABC transporter confers kanamycin resistance to transgenic plants. Nat Biotech 23:11771180, 2005.
Gynheung A.: High efficiency transformation of cultred tabacco cells. Plant Physiol 79, 568-570, 1985.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
-
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Průběh obhajoby:
V úvodu obhajoby předseda komise prof. RNDr. Jozef Šamaj, Dr.Sc. představil studenta přítomným akademickým pracovníkům a hostům. V rámci prezentace své práce student seznámil všechny zúčastněné s cíli práce a hlavními metodami využitými při jejím zpracování, dále se získanými výsledky a z nich vyplývajícími závěry.
Následně byl přečten oponentní posudek. Odpovědi na otázky a připomínky uvedené v posudku oponenta a vedoucího bakalářské práce student zodpověděl uspokojivě, doložil je vypracované v písemné formě a prezentovala také ústně.
V rámci veřejné diskuse zodpověděla následující dotazy položené přítomnými odborníky:
Dr. Komis:
How many ABC transporters have been specified in Nicotiana?
What is the mechanism of the resistence to the antibiotics?
Why did you choose barely ABC1 protein?
Why did you choose Nicotiana plant for the experiments?
Dr. Křenek:
Kolik rostlin regenerovalo u netransformovaných disků? Testoval jste takovou kontrolu?
Uvádíte, že GUS je po transformaci rostlin přítomen. U stabilně transformovaných rostlin jste již prověřil přítomnost transgenu?
doc. Ovečka:
Do jaké koncentrace antibiotika transgenní rostliny regenerují?
Prof. Šamaj:
Jaký promotor jste použili pro konstrukt a jaký promotor plánujete použít pro transformaci ječmene pro dostatečnou expresi proteinu?