Tato bakalářská práce se zabývá problematikou alogenních transplantací hematopoetických kmenových buněk (HSC) u pacientů s hematoonkologickými onemocněními a možnostmi sledování hladiny buněčného chimerismu metodami molekulárně biologickými aj. u pacientů, kteří alogenní transplantaci HSC podstoupili.
Teoretická část shrnuje základní fakta o kmenových buňkách s důrazem na HSC a krvetvorbu. Také se věnuje problematice transplantací HSC a laboratorním metodám vyžívaným při sledování hladiny dárcovského chimerismu po alogenních transplantacích HSC.
Experimentální část zahrnuje vyšetření předtransplantačních a následně
i potransplantačních vzorků u vybraných pacientů pomocí STR-PCR a fragmentační analýzy. Pomocí této metody byla provedena genotypizace 4 pacientů a jejich dárců a analyzováno 19 potransplantačních vzorků, u nichž bylo sledováno postupné přihojování štěpu, remise a u 2 pacientů i relaps onemocnění.
Anotace v angličtině
This bachelor thesis is focused on allogeneic transplantations of hematopoietic stem cells (HSCT) in patients suffering from hematologic malignancies. It describes available methods for chimerism monitoring by molecular methods in case of patients, who has undergone the HSC transplantation.
The theoretical part summarizes the information about stem cells - hematopoietic stem cells in particular, and hematopoiesis. Furthermore, it deals with the topic of HSC transplantations and the methods used for monitoring of donor chimerism levels after the allogeneic HSCTs.
The experimental part presents pre-transplant and post-transplant analyses of samples from 4 chosen patients. Analyses consist of genotypizations of the patients and their donors and post-transplant evaluation of 19 samples. The method used in this case is STR-PCR followed by fragment analysis performed on genetic analyser ABI 3100. The engraftment, as well as remision and relaps have been detected.
Tato bakalářská práce se zabývá problematikou alogenních transplantací hematopoetických kmenových buněk (HSC) u pacientů s hematoonkologickými onemocněními a možnostmi sledování hladiny buněčného chimerismu metodami molekulárně biologickými aj. u pacientů, kteří alogenní transplantaci HSC podstoupili.
Teoretická část shrnuje základní fakta o kmenových buňkách s důrazem na HSC a krvetvorbu. Také se věnuje problematice transplantací HSC a laboratorním metodám vyžívaným při sledování hladiny dárcovského chimerismu po alogenních transplantacích HSC.
Experimentální část zahrnuje vyšetření předtransplantačních a následně
i potransplantačních vzorků u vybraných pacientů pomocí STR-PCR a fragmentační analýzy. Pomocí této metody byla provedena genotypizace 4 pacientů a jejich dárců a analyzováno 19 potransplantačních vzorků, u nichž bylo sledováno postupné přihojování štěpu, remise a u 2 pacientů i relaps onemocnění.
Anotace v angličtině
This bachelor thesis is focused on allogeneic transplantations of hematopoietic stem cells (HSCT) in patients suffering from hematologic malignancies. It describes available methods for chimerism monitoring by molecular methods in case of patients, who has undergone the HSC transplantation.
The theoretical part summarizes the information about stem cells - hematopoietic stem cells in particular, and hematopoiesis. Furthermore, it deals with the topic of HSC transplantations and the methods used for monitoring of donor chimerism levels after the allogeneic HSCTs.
The experimental part presents pre-transplant and post-transplant analyses of samples from 4 chosen patients. Analyses consist of genotypizations of the patients and their donors and post-transplant evaluation of 19 samples. The method used in this case is STR-PCR followed by fragment analysis performed on genetic analyser ABI 3100. The engraftment, as well as remision and relaps have been detected.
Literární rešerše bude zpracována na téma alogenní trasplantace hematopoetických kmenových buněk. Studentka se seznámí s problematikou genotypování pomocí molekulárních markerů (VNTR, STR). Dále si nastuduje principy základních molekulárních metod (PCR, sekvenování, fragmantační analýza, qRT-PCR). Získané poznatky pak budou uplatněny v praktické části bakalářské práce.
1) Teoretická část: nastudování příslušné literatury na zvolené téma a seznámení s problematikou. Vypracování literární rešerše.
2) Praktická část: analýza genotypu příjemce a dárce pomocí simplex fluorescenční PCR s následnou fragmentační analýzou PCR produktu. Stanovení informativity jednotlivých STR lokusů.
3) Praktická část: potrasplantační vyšetření pacientů se stanovením procentuálního zástoupení dárcovské chiméry u příjemce.
Zásady pro vypracování
Literární rešerše bude zpracována na téma alogenní trasplantace hematopoetických kmenových buněk. Studentka se seznámí s problematikou genotypování pomocí molekulárních markerů (VNTR, STR). Dále si nastuduje principy základních molekulárních metod (PCR, sekvenování, fragmantační analýza, qRT-PCR). Získané poznatky pak budou uplatněny v praktické části bakalářské práce.
1) Teoretická část: nastudování příslušné literatury na zvolené téma a seznámení s problematikou. Vypracování literární rešerše.
2) Praktická část: analýza genotypu příjemce a dárce pomocí simplex fluorescenční PCR s následnou fragmentační analýzou PCR produktu. Stanovení informativity jednotlivých STR lokusů.
3) Praktická část: potrasplantační vyšetření pacientů se stanovením procentuálního zástoupení dárcovské chiméry u příjemce.
Seznam doporučené literatury
1. Hancock JP, Goulden NJ, Oakhill A, Steward CG. Quantitative analysis of chimerism after allogeneic bone marrow transplantation using immunomagnetic selection and fluorescent microsatellite PCR. Leukemia. 2003;17(1):247-51.
2. Nollet F, Billiet J, Selleslag D, Criel A. Standardisation of multiplex fluorescent short tandem repeat analysis for chimerism testing. Bone Marrow Transplant. 2001;28(5):511-8.
Seznam doporučené literatury
1. Hancock JP, Goulden NJ, Oakhill A, Steward CG. Quantitative analysis of chimerism after allogeneic bone marrow transplantation using immunomagnetic selection and fluorescent microsatellite PCR. Leukemia. 2003;17(1):247-51.
2. Nollet F, Billiet J, Selleslag D, Criel A. Standardisation of multiplex fluorescent short tandem repeat analysis for chimerism testing. Bone Marrow Transplant. 2001;28(5):511-8.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Obhajobu bakalářské práce studentky Kláry Horáčkové zahájil prof. RNDr. Zdeněk Dvořák, DrSc. et Ph.D. Studentka seznámila komisi s hlavními částmi a výsledky své práce. Následovalo přečtení posudku vedoucí práce Mgr. Jany Navrátilové a oponentky RNDr. Martiny Divoké, Ph.D.
Studentka pak reagovala na připomínky a dotazy.
Prezentace studentky obsahovala tato témata:
" Potransplantační chimerismus - druhy
" Využití sledování chimerismu
" Metody sledování chimerismu
" Experimentální provedení práce
V rozpravě byly uvedeny následující připomínky či nastoleny tyto problémy:
" Stutter peaks a jejich vliv na analýzu výsledků
" Výška peaků v elektroforetogramu a jejich vliv na hodnocení
" Dvojitá transplantace pacienta vzhledem k dárcovskému původu buněk
" Minimální reziduální choroba a vliv monitorovací techniky
Studentka na dotazy položené oponentkou práce a členy komise reagovala pohotově, věcně a přiměřeně.
Hodnocení: A