Diplomová práce by se měla zabývat multi analýzou vybraných léčiv v pacientských vzorcích séra pomocí kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí. Snahou bude nalezení chromatografických a hmotnostní podmínek analýzy tak, aby došlo k citlivé a přesné analýze co možná největšího počtu vybraných léčiv. Vlastní práce se soustředila i na testování různých extrakčních postupů s cílem dosáhnout co nejlepší detekčních hodnot. Nově vyvinutá metoda byla validována a měla by být využita do budoucna na oddělení klinické farmakologie, Ústavu laboratorní medicíny, FN Ostrava pro analýzu pacientských vzorků séra. přelož do angličtiny
Anotace v angličtině
The diploma thesis aims to focus on the multi-analysis of selected drugs in patient serum samples using liquid chromatography with tandem mass spectrometry. The goal is to find chromatographic and mass conditions for the most sensitive and precise analysis of as many selected drugs as possible. The thesis also focuses on testing different extraction methods to achieve the best detection values. The newly developed method has been validated and should be used in the future at the Department of Clinical Pharmacology, Institute of Laboratory Medicine, University Hospital Ostrava for analysis of human serum samples
Liquid chromatography, tandem mass spectrometry, drug analysis, human serum
Rozsah průvodní práce
178
Jazyk
CZ
Anotace
Diplomová práce by se měla zabývat multi analýzou vybraných léčiv v pacientských vzorcích séra pomocí kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí. Snahou bude nalezení chromatografických a hmotnostní podmínek analýzy tak, aby došlo k citlivé a přesné analýze co možná největšího počtu vybraných léčiv. Vlastní práce se soustředila i na testování různých extrakčních postupů s cílem dosáhnout co nejlepší detekčních hodnot. Nově vyvinutá metoda byla validována a měla by být využita do budoucna na oddělení klinické farmakologie, Ústavu laboratorní medicíny, FN Ostrava pro analýzu pacientských vzorků séra. přelož do angličtiny
Anotace v angličtině
The diploma thesis aims to focus on the multi-analysis of selected drugs in patient serum samples using liquid chromatography with tandem mass spectrometry. The goal is to find chromatographic and mass conditions for the most sensitive and precise analysis of as many selected drugs as possible. The thesis also focuses on testing different extraction methods to achieve the best detection values. The newly developed method has been validated and should be used in the future at the Department of Clinical Pharmacology, Institute of Laboratory Medicine, University Hospital Ostrava for analysis of human serum samples
Liquid chromatography, tandem mass spectrometry, drug analysis, human serum
Zásady pro vypracování
Zpracujte stručně literární rešerši zabývající se analýzou vybraných léčiv pomocí kapalinové chromatografie s MS detekcí.
Prostudujte metody úpravy biologické matrice pro účely kvantifikace těchto látek z pacientských vzorků séra.
Nastavte vhodné chromatografické a detekční podmínky pro analýzu vybraných léčiv.
Otestujte různé postupy úpravy biologické matrice (séra) pro analýzu vybraných léčiv.
Validace analytické metody podle FDA kritérií pro validace bioanalytických metod.
Naměřená data kriticky vyhodnoťte na reálných pacientských vzorcích.
Zásady pro vypracování
Zpracujte stručně literární rešerši zabývající se analýzou vybraných léčiv pomocí kapalinové chromatografie s MS detekcí.
Prostudujte metody úpravy biologické matrice pro účely kvantifikace těchto látek z pacientských vzorků séra.
Nastavte vhodné chromatografické a detekční podmínky pro analýzu vybraných léčiv.
Otestujte různé postupy úpravy biologické matrice (séra) pro analýzu vybraných léčiv.
Validace analytické metody podle FDA kritérií pro validace bioanalytických metod.
Naměřená data kriticky vyhodnoťte na reálných pacientských vzorcích.
Seznam doporučené literatury
Nováková L, Douša M. Moderní HPLC separace v teorii a praxi. Praha [i.e. Hradec Králové]: Lucie Nováková, 2013. ISBN 978-80-260-4243-3.
Li W, Jian W, Fu Y. Sample Preparation in LC-MS Bioanalysis: Wiley; 2019.
Chamberlain J. The Analysis of Drugs in Biological Fluids: CRC Press; 2018.
Hansen SH, Pedersen-Bjergaard S. Bioanalysis of Pharmaceuticals: Sample Preparation, Separation Techniques and Mass Spectrometry: Wiley; 2015.
Seznam doporučené literatury
Nováková L, Douša M. Moderní HPLC separace v teorii a praxi. Praha [i.e. Hradec Králové]: Lucie Nováková, 2013. ISBN 978-80-260-4243-3.
Li W, Jian W, Fu Y. Sample Preparation in LC-MS Bioanalysis: Wiley; 2019.
Chamberlain J. The Analysis of Drugs in Biological Fluids: CRC Press; 2018.
Hansen SH, Pedersen-Bjergaard S. Bioanalysis of Pharmaceuticals: Sample Preparation, Separation Techniques and Mass Spectrometry: Wiley; 2015.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Studentka představila komisi svou diplomovou práci na téma Multi analýza vybraných léčiv v séru pomocí kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí. Na úvod přítomné seznámila s analyzovanými analyty a problematikou jejich kvantifikace. Prezentovala nastavení parametrů LC-MS/MS metody, nastavení podmínek analýzy a metodu úpravy vzorků séra. Rozsáhle diskutovala validaci metody a získané výsledky. Závěrem shrnula počet zvalidovaných látek a důvody nesplnění validací některých látek.
Vedoucí práce shrnul obsah práce. Představil praktický význam práce, kdy by studentkou vyvinutá metoda měla nahradit 12 analytických metod používaných na oddělení klinické farmakologie FN Ostrava. Ocenil odborný přístup studentky i formální kvalitu práce, která podle něj přesahuje rámec požadavků pro práci magisterského studia. V rámci diskuze položil tyto otázky: Kolik reálných pacientských vzorků séra bylo nově vyvinutou metodou stanoveno? Byla výsledná data porovnávána s výsledky stanovení původními metodami stanovení na oddělení klinické farmakologie? V dnešní době se dostávají do popředí jiné analytické techniky úpravy biologické matrice (krev). Mohla by autorka zmínit i jiné metody úpravy vzorků, než které zmiňuje v teoretické části? Studentka na dotazy uspokojivě odpověděla. Vedoucí práci doporučil k obhajobě.
Oponent stručně shrnul obsah práce. Ocenil srozumitelnost a kvalitu práce, především přehlednost tabulek. Jediná výtka směřovala k desetinným tečkám, které se v některých tabulkách objevují místo desetinných čárek. Do diskuze položil tyto otázky: Mohla by autorka upřesnit postup z kapitoly 7.11.1? Jaké roztoky byly pipetovány do séra (viz nadávkování 100 μl standardu do 200 μl séra)? Mohla by autorka vysvětlit, proč je kyselina valproová kvantifikována sama na sebe (viz tabulka 63)? V kapitole 8.2 jsou jako nejlepší metody úpravy vzorku označeny metody 3 a 4. Metoda číslo 3 však neumožňuje stanovení dvou látek a u některých látek poskytuje výrazně nižší odezvu. Proč byla nakonec vybrána metoda číslo 3 jako nejlepší? V kapitole 8.4 je zmíněna kontrola stanovení LEV nově vyvinutou metodou se zavedenou metodou ve FNO. Autorka píše „Výsledky obou stanovení byly velmi podobné.“ Byly tyto výsledky nějak statisticky testovány? Studentka na tyto dotazy uspokojivě odpověděla. Oponent práci doporučil k obhajobě.
Při veřejné diskuzi byly položeny následující dotazy: Jaký parametr jste validovala na základě výtěžnosti? Jaký má fyzikální význam, že některé kalibrační závislosti jsou lineární a některé kvadratické? Studentka na všechny dotazy uspokojivě odpověděla.