V teoretické části je práce zaměřena na disulfiram a jeho metabolit CuEt. Jsou prozkoumány signální dráhy zodpovědné za aktivaci imunitních buněk. V experimentální části je ověřen efekt nanomolárnách koncentrací CuEt na CD8+ a CD4+ myší T-lymfocyty. Přesněji je ověřena fosforylace ERK1/2 a exprese NKG2D a perforinu. Dosažené výsledky jsou prodiskutovány a jsou z nich vyvozeny závěry.
Anotace v angličtině
The theoretical part is focused on disulfiram and its metabolite CuEt. The signaling pathways responsible for the priming of immune cells are investigated. In the experimental part the effect of nanomolar concentrations of CuEt on CD8+ and CD4+ T-cells is measured. More precisely ERK1/2 phosphorylation and expression of NKG2D and perforin is measured. The aquired results are discussed and conclusions are made from them.
V teoretické části je práce zaměřena na disulfiram a jeho metabolit CuEt. Jsou prozkoumány signální dráhy zodpovědné za aktivaci imunitních buněk. V experimentální části je ověřen efekt nanomolárnách koncentrací CuEt na CD8+ a CD4+ myší T-lymfocyty. Přesněji je ověřena fosforylace ERK1/2 a exprese NKG2D a perforinu. Dosažené výsledky jsou prodiskutovány a jsou z nich vyvozeny závěry.
Anotace v angličtině
The theoretical part is focused on disulfiram and its metabolite CuEt. The signaling pathways responsible for the priming of immune cells are investigated. In the experimental part the effect of nanomolar concentrations of CuEt on CD8+ and CD4+ T-cells is measured. More precisely ERK1/2 phosphorylation and expression of NKG2D and perforin is measured. The aquired results are discussed and conclusions are made from them.
In mouse models, the impact of CuEt stimulation is observed at an earlier time point and in higher magnitude in splenocytes obtained from C57BL6 mice compared to those obtained from BALBc mice. In vivo experiments corroborated that in the C57BL6 mice, a significant decrease in tumour burden is observed, while the decline in tumour mass is not significant in BALBc mice. We hypothesize that this difference can be due to a preferential stimulation of CuEt on CD8 and NK cell populations rather than CD4 cells.
Splenocytes obtained from both mouse strains will be separated by antibodies with magnetic beads and tested for priming using cytometry for cell priming using an anti-CD314 antibody and intracellular perforin after 18h stimulation to ascertain the generation of killer efficient CD8 cells. In parallel, the purified CD4 and CD8 cells will be stimulated in vitro and SDS-PAGE followed by a western blot will be performed to asses ERK/pERK. The aim is to investigate the activation of the ERK pathway by nanomolar concentrations of CuEt and relation of CuEt stimulation of T-cells to their higher cytotoxicity and priming.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie https://www.prf.upol.cz/katedra-biochemie/studium/bakalarske-a-diplomove-prace/.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Zásady pro vypracování
In mouse models, the impact of CuEt stimulation is observed at an earlier time point and in higher magnitude in splenocytes obtained from C57BL6 mice compared to those obtained from BALBc mice. In vivo experiments corroborated that in the C57BL6 mice, a significant decrease in tumour burden is observed, while the decline in tumour mass is not significant in BALBc mice. We hypothesize that this difference can be due to a preferential stimulation of CuEt on CD8 and NK cell populations rather than CD4 cells.
Splenocytes obtained from both mouse strains will be separated by antibodies with magnetic beads and tested for priming using cytometry for cell priming using an anti-CD314 antibody and intracellular perforin after 18h stimulation to ascertain the generation of killer efficient CD8 cells. In parallel, the purified CD4 and CD8 cells will be stimulated in vitro and SDS-PAGE followed by a western blot will be performed to asses ERK/pERK. The aim is to investigate the activation of the ERK pathway by nanomolar concentrations of CuEt and relation of CuEt stimulation of T-cells to their higher cytotoxicity and priming.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie https://www.prf.upol.cz/katedra-biochemie/studium/bakalarske-a-diplomove-prace/.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Seznam doporučené literatury
Lin, WH., Chang, YW., Hong, MX. et al. STAT3 phosphorylation at Ser727 and Tyr705 differentially regulates the EMT–MET switch and cancer metastasis. Oncogene 40, 791–805 (2021).
Zhu S, Phatarpekar PV, Denman CJ, et al. Transcription of the activating receptor NKG2D in natural killer cells is regulated by STAT3 tyrosine phosphorylation. Blood. 2014;124(3):403-411. doi:10.1182/blood-2013-05-499707
Yali L et al. Inhibition of Stat3 Signaling Pathway by Natural Product Pectolinarigenin Attenuates Breast Cancer Metastasis. Frontiers in Pharmacology 2019.01195
Li, T., Fu, X., Tse, A.KW. et al. Inhibiting STAT3 signaling is involved in the anti-melanoma effects of a herbal formula comprising Sophorae Flos and Lonicerae Japonicae Flos. Sci Rep 7, 3097 (2017).
Seo JH, Lim JW, Kim H.Differential Role of ERK and p38 of NF-κB Activation in Helicobacter pylori-Infected gastric ephitelial cells. J Cancer Prev. 2013;18(4):346-350. doi:10.15430/jcp.2013.18.4.346
Seznam doporučené literatury
Lin, WH., Chang, YW., Hong, MX. et al. STAT3 phosphorylation at Ser727 and Tyr705 differentially regulates the EMT–MET switch and cancer metastasis. Oncogene 40, 791–805 (2021).
Zhu S, Phatarpekar PV, Denman CJ, et al. Transcription of the activating receptor NKG2D in natural killer cells is regulated by STAT3 tyrosine phosphorylation. Blood. 2014;124(3):403-411. doi:10.1182/blood-2013-05-499707
Yali L et al. Inhibition of Stat3 Signaling Pathway by Natural Product Pectolinarigenin Attenuates Breast Cancer Metastasis. Frontiers in Pharmacology 2019.01195
Li, T., Fu, X., Tse, A.KW. et al. Inhibiting STAT3 signaling is involved in the anti-melanoma effects of a herbal formula comprising Sophorae Flos and Lonicerae Japonicae Flos. Sci Rep 7, 3097 (2017).
Seo JH, Lim JW, Kim H.Differential Role of ERK and p38 of NF-κB Activation in Helicobacter pylori-Infected gastric ephitelial cells. J Cancer Prev. 2013;18(4):346-350. doi:10.15430/jcp.2013.18.4.346
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, schémata
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
V úvodu obhajoby předseda komise prof. Mgr. Marek Petřivalský, Dr. představil studenta přítomným akademickým pracovníkům a hostům. V rámci prezentace své práce Effect of CuEt on murine T cells and its role in tumour cytotoxicity student seznámil všechny zúčastněné s cíli práce a hlavními metodami využitými při jejím zpracování, dále se získanými výsledky a z nich vyplývajícími závěry.
Následně byl přečten posudek vedoucího práce a oponentský posudek. Student zodpověděl dotazy položené v posudku oponenta. Odpověděl také na dotazy členů zkušební komise:
prof. Šebela: Měl jste možnost ověřit, že koncentrace opravdu odpovídá dané koncentraci? Byly komponenty dobře rozpustné ve vodě?
prof. Petřivalský: Máte vysvětlení, proč je vyšší koncentrace méně efektivní?
dr. Škrabišová: Jaké statistické hodnocení jste použili pro hodnocení rozdílů?