Bylo prokázáno, že disulfiram a jeho metabolit diethyldithiocarbamate komplexovaný s mědí (CuET) účinně indukuje smrt nádorových buněk. Jeden z navrhovaných mechanismů tohoto děje je skrz membránovou expresi stresových proteinů. Naší hypotézou je, že CuET stimuluje imunitní buněčnou odpověd aktivací cytotoxických lymfocytů a indukuje expresi antigenu v nádorových buňkách. Použili jsme splenocyty extrahované z Balb/c myšího modelu, které byly stimulovány in vitro, a použity proti 4T1 Balb/c buněčné linii karcinomu prsu, a analyzovali jsme efekt CuET na fosforylaci proteinů - fosfotyrosinu, jakožto signál brzké aktivace. Byly provedeny kinetické studie a výsledky byly srovnány s výsledky obdrženými pro C57BL/6 myši. Pozorovali jsme časově a koncentračně závislý nárůst cytotoxicity splenocytů po ošetření, stejně jako nárůst fosforylace tyrosinu. Hodnoty proteinů fosforylovaných na tyrosinu byly zvýšené, a paralelně bylo zjištěno, že splenocyty vykazovaly vyšší míru cytotoxicity proti nádorové buněčné linii. Zdá se, že část aktivačního signálu indukovaného CuET je závislá na aktivaci ERK proteinu.
Anotace v angličtině
Disulfiram and its metabolite diethyldithiocarbamate coupled with copper (CuET) have been shown to efficiently induce tumor cell death. One of the proposed mechanism is membrane expression of stress proteins. Our hypothesis is that CuET stimulates immune cell response by activating cytotoxic lymphocytes and induces antigen expression in tumor cells. We used Balb/c mouse splenocytes stimulated in vitro, challanged against the 4T1 Balb/c breast cancer tumor cell line and analyzed the effect of CuET on protein phosphorylation, phosphotyrosine, as an early activation signal. Kinetic studies were performed and the results were compared with those obtained with C57BL6 mice. We observed a time and concentration dependent increase in splenocyte cytotoxicity upon treatment, as well as an increase in tyrosine phosphorylation. Phosphotyrosine protein levels were increased, and in parallel, splenocytes were more cytotoxic against the tumor cell line. Part of the activation signal induced by CuET seems to be dependent on ERK activation.
Bylo prokázáno, že disulfiram a jeho metabolit diethyldithiocarbamate komplexovaný s mědí (CuET) účinně indukuje smrt nádorových buněk. Jeden z navrhovaných mechanismů tohoto děje je skrz membránovou expresi stresových proteinů. Naší hypotézou je, že CuET stimuluje imunitní buněčnou odpověd aktivací cytotoxických lymfocytů a indukuje expresi antigenu v nádorových buňkách. Použili jsme splenocyty extrahované z Balb/c myšího modelu, které byly stimulovány in vitro, a použity proti 4T1 Balb/c buněčné linii karcinomu prsu, a analyzovali jsme efekt CuET na fosforylaci proteinů - fosfotyrosinu, jakožto signál brzké aktivace. Byly provedeny kinetické studie a výsledky byly srovnány s výsledky obdrženými pro C57BL/6 myši. Pozorovali jsme časově a koncentračně závislý nárůst cytotoxicity splenocytů po ošetření, stejně jako nárůst fosforylace tyrosinu. Hodnoty proteinů fosforylovaných na tyrosinu byly zvýšené, a paralelně bylo zjištěno, že splenocyty vykazovaly vyšší míru cytotoxicity proti nádorové buněčné linii. Zdá se, že část aktivačního signálu indukovaného CuET je závislá na aktivaci ERK proteinu.
Anotace v angličtině
Disulfiram and its metabolite diethyldithiocarbamate coupled with copper (CuET) have been shown to efficiently induce tumor cell death. One of the proposed mechanism is membrane expression of stress proteins. Our hypothesis is that CuET stimulates immune cell response by activating cytotoxic lymphocytes and induces antigen expression in tumor cells. We used Balb/c mouse splenocytes stimulated in vitro, challanged against the 4T1 Balb/c breast cancer tumor cell line and analyzed the effect of CuET on protein phosphorylation, phosphotyrosine, as an early activation signal. Kinetic studies were performed and the results were compared with those obtained with C57BL6 mice. We observed a time and concentration dependent increase in splenocyte cytotoxicity upon treatment, as well as an increase in tyrosine phosphorylation. Phosphotyrosine protein levels were increased, and in parallel, splenocytes were more cytotoxic against the tumor cell line. Part of the activation signal induced by CuET seems to be dependent on ERK activation.
Hypothesis: Tumor antigen expression is enhanced upon incubation with CuEt. Objective: Stimulation of the tumour cell line with CuEt with different concentrations and time points in order to induce the expression of proteins that serve as antigens for immune cell recognition. Material and methods: Lymphocytes from the spleen of BALBc mice will be extracted and challenged against the mouse mammary tumour cell line 4T1 previously incubated in the presence of CuEt. The recognition of antigens will result in higher cytotoxic response against the tumour. In order to ascertain the effect of the expressed antigens, cell will be incubated with chloroquine as inhibitor of antigen expression. Tumour cells will be challenged and rechallenged with CuEt in order to define possible resistance and lack of antigen expression
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce studijního programu Biochemie PřF UP, studijního oboru Biotechnologie a genové inženýrství.
Práce bude studentem nejdříve vložena v elektronické podobě ve formátu pdf do systému STAG a doplněna povinnými údaji o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci)
Odevzdání závěrečné práce na sekretariátě Katedry biotechnologií ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce proběhne v řádném termínu uvedeném v harmonogramu na webové stránce
Katedry biotechnologií.( http://kbt.upol.cz/ )
Zásady pro vypracování
Hypothesis: Tumor antigen expression is enhanced upon incubation with CuEt. Objective: Stimulation of the tumour cell line with CuEt with different concentrations and time points in order to induce the expression of proteins that serve as antigens for immune cell recognition. Material and methods: Lymphocytes from the spleen of BALBc mice will be extracted and challenged against the mouse mammary tumour cell line 4T1 previously incubated in the presence of CuEt. The recognition of antigens will result in higher cytotoxic response against the tumour. In order to ascertain the effect of the expressed antigens, cell will be incubated with chloroquine as inhibitor of antigen expression. Tumour cells will be challenged and rechallenged with CuEt in order to define possible resistance and lack of antigen expression
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce studijního programu Biochemie PřF UP, studijního oboru Biotechnologie a genové inženýrství.
Práce bude studentem nejdříve vložena v elektronické podobě ve formátu pdf do systému STAG a doplněna povinnými údaji o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci)
Odevzdání závěrečné práce na sekretariátě Katedry biotechnologií ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce proběhne v řádném termínu uvedeném v harmonogramu na webové stránce
Katedry biotechnologií.( http://kbt.upol.cz/ )
Seznam doporučené literatury
Cerezo-Wallis, D., Soengas, MS. Understanding Tumor-Antigen Presentation in the New Era of Cancer Immunotherapy. Curr Pharm Des. 22(41), 6234-6250 (2016).
Coico Richard and Geoffrey Sunshine. Immunology: A Short Course. 7th ed. Chichester: John Wiley & Sons Ltd, 2015.
Skrott, Z., Mistrik, M., Andersen, KK., Friis, S., Majera, D., Gursky, J., Ozdian, et al. J. Alcohol-abuse drug disulfiram targets cancer via p97 segregase adaptor NPL4. Nature552(7684), 194-199 (2017).
Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, GG. Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer. BMC Cancer8:228 (2008).
Seznam doporučené literatury
Cerezo-Wallis, D., Soengas, MS. Understanding Tumor-Antigen Presentation in the New Era of Cancer Immunotherapy. Curr Pharm Des. 22(41), 6234-6250 (2016).
Coico Richard and Geoffrey Sunshine. Immunology: A Short Course. 7th ed. Chichester: John Wiley & Sons Ltd, 2015.
Skrott, Z., Mistrik, M., Andersen, KK., Friis, S., Majera, D., Gursky, J., Ozdian, et al. J. Alcohol-abuse drug disulfiram targets cancer via p97 segregase adaptor NPL4. Nature552(7684), 194-199 (2017).
Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, GG. Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer. BMC Cancer8:228 (2008).
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, schémata, tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Průběh obhajoby:
V úvodu obhajoby předseda komise prof. Mgr. Miroslav Ovečka, Ph.D. představil studentku přítomným akademickým pracovníkům a hostům. V rámci prezentace své práce studentka seznámila všechny zúčastněné s cíli práce a hlavními metodami využitými při jejím zpracování, dále se získanými výsledky a z nich vyplývajícími závěry.
Následně byl přečten posudek vedoucího práce a oponentní posudek. Odpovědi na otázky a připomínky uvedené v posudku vedoucího bakalářské práce a oponenta studentka zodpověděla.
V rámci veřejné diskuse student zodpověděl následující dotazy položené přítomnými odborníky:
Ing. Pavel Křenek, Ph.D.: Jsou známé i jiné stimulanty zvyšující cytotoxický efekt na nádorové buňky?
prof. Mgr. Miroslav Ovečka, Ph.D.: Jsou dříve získané výsledky, které chcete využít na porovnání stejné, nebo vykazují určité rozdíly?