Vysokokapacitný skríning je pomerne nová technika, ktorá sa vo veľkej miere využiva pri objave liekov vo farmaceutickom priemysle. Táto technika umožňuje stanovenie aktivity veľkého množstva látok a má mnoho výhod v porovnaní s tradičnými metódami skríningu. K výhodám tejto metódy patrí jej rýchlosť, jednoduchosť, nízke náklady a vysoká účinnosť.
Cieľom tejto práce bolo stanovenie cytotoxických účinkov in vitro nových chemických látok z unikátnej ÚMTM knižnice. Tieto látky boli testované na nádorových a nenádorových bunkových líniách v 385- jamkových doštičkách. Stanovenie cytotoxických účinkov bolo prevedené pomocou MTS testu v HTS podmienkach. Pri primárnom skríningu bolo celkovo otestovaných 72 látok a z nich vyselektovaných 24 neaktívnych látok, na základe hodnoty PI. V sekundárnom skríningu boli otestované len aktívne látky z primárneho skríningu a následne
boli stanovené hodnoty IC50 v programe Dotmatics.
Anotace v angličtině
High throughput screening is quite a new technique, that is used in discovery of drugs in farmaceutic industry. This technique enables to determinate the activity of many substances and has many advantages in comparison to the traditional screening methods. Advantages of this methods are its speed, simplicity, low expenses and high efficiency.
The aim of this work was to qualify the cytotoxic effect in vitro of new chemical substances from unique ÚMTM library. The substances were tested on tumor and antitumor cell lines in 385-well plates. Determination of cytotoxic effects was made by MTS assay in HTS conditions. 72 substances were tested in a primary screening and 24 of them were defined as inactive according the PI value. Only active substances, from the primary screening, were tested in a secondary screening. After that the IC50 value was determined for all substances ina program called Dotmatics.
Klíčová slova
cytotoxicita, HTS
Klíčová slova v angličtině
cytotoxicity, HTS
Rozsah průvodní práce
55 s
Jazyk
SK
Anotace
Vysokokapacitný skríning je pomerne nová technika, ktorá sa vo veľkej miere využiva pri objave liekov vo farmaceutickom priemysle. Táto technika umožňuje stanovenie aktivity veľkého množstva látok a má mnoho výhod v porovnaní s tradičnými metódami skríningu. K výhodám tejto metódy patrí jej rýchlosť, jednoduchosť, nízke náklady a vysoká účinnosť.
Cieľom tejto práce bolo stanovenie cytotoxických účinkov in vitro nových chemických látok z unikátnej ÚMTM knižnice. Tieto látky boli testované na nádorových a nenádorových bunkových líniách v 385- jamkových doštičkách. Stanovenie cytotoxických účinkov bolo prevedené pomocou MTS testu v HTS podmienkach. Pri primárnom skríningu bolo celkovo otestovaných 72 látok a z nich vyselektovaných 24 neaktívnych látok, na základe hodnoty PI. V sekundárnom skríningu boli otestované len aktívne látky z primárneho skríningu a následne
boli stanovené hodnoty IC50 v programe Dotmatics.
Anotace v angličtině
High throughput screening is quite a new technique, that is used in discovery of drugs in farmaceutic industry. This technique enables to determinate the activity of many substances and has many advantages in comparison to the traditional screening methods. Advantages of this methods are its speed, simplicity, low expenses and high efficiency.
The aim of this work was to qualify the cytotoxic effect in vitro of new chemical substances from unique ÚMTM library. The substances were tested on tumor and antitumor cell lines in 385-well plates. Determination of cytotoxic effects was made by MTS assay in HTS conditions. 72 substances were tested in a primary screening and 24 of them were defined as inactive according the PI value. Only active substances, from the primary screening, were tested in a secondary screening. After that the IC50 value was determined for all substances ina program called Dotmatics.
Klíčová slova
cytotoxicita, HTS
Klíčová slova v angličtině
cytotoxicity, HTS
Zásady pro vypracování
vypracovanie rešerše na tému bakalárskej práce
práca s ľudskými bunkovými líniami v sterilných podmienkach
anylýza cytotoxických účinkov nových chemických látok na úrovni HTS, primárny a sekundárny skrining
stanovenie hodnoty IC50
Zásady pro vypracování
vypracovanie rešerše na tému bakalárskej práce
práca s ľudskými bunkovými líniami v sterilných podmienkach
anylýza cytotoxických účinkov nových chemických látok na úrovni HTS, primárny a sekundárny skrining
Obhajobu bakalářské práce studentky Dominiky Zabákové zahájil prof. RNDr. Zdeněk Dvořák, DrSc. et Ph.D. Studentka seznámila komisi s hlavními částmi a výsledky své práce. Následovalo přečtení posudku vedoucí práce Ing. Soni Gurské, Ph.D. a oponentky Mgr. Barbory Liškové, Ph.D.
Studentka pak reagovala na připomínky a dotazy.
Prezentace studentky obsahovala tato témata:
- In vitro cytotoxicita, buněčné poškození a jeho typy
- Testy buněčné viability, proliferace a metaboilické aktivity
- MTS test - princip
- Vysokokapacitní skríning
- Experimentální provedení práce
V rozpravě byly uvedeny následující připomínky či nastoleny tyto problémy:
- Použití 3D buněčných linií - jak by se musel změnit pracovní postup
- Citlivost použitých buněčných linií
- Z faktor a jeho vysvětlení
- Termíny cytokiny a cytokininy
- Rozdíl mezi MTT a MTS testem
- Způsob pipetování vzorků
Studentka na dotazy položené oponentkou práce a členy komise reagovala věcně, pohotově a přiměřeně.