Tato diplomová práce se zabývá potenciálním využitím exprese CD64 na neutrofilních granulocytech jako markeru sepse u závažně nemocných dospělých. K jeho stanovení byla využita metoda průtokové cytomerie.
V teoretické části jsou shrnuty nejnovější poznatky o sepsi a její diagnostice pomocí markerů, jako je C-reaktivní protein, prokalcitonin, interleukin-6, CD64 či sTREM-1. Dále jsou zde popsány základy průtokové cytomerie.
V praktické části je popsána metodika odběru a zpracování vzorků periferní krve, následné měření pomocí průtokového cytometru, detekce CD64 a gatovací strategie. Dále jsou zde uvedeny výsledky experimentu a jejich statistická analýza.
Diplomová práce potvrdila význam stanovení exprese CD64 pomocí průtokové cytometrie u závažně nemocných dospělých k časné identifikaci sepse. Významným zjištěním byla možnost využití této metody u intenzivně léčených hemato onkologických pacientů s extrémně nízkým počtem granulocytů, u kterých klasické metody selhávají.
Anotace v angličtině
This thesis deals with potential use of CD64 expression on neutrophilic granulocytes as a marker of sepsis in severely ill adults. Flow cytometry was used for determination of CD64.
The theoretical part summarizes the latest knowledge about sepsis and its diagnosis using markers such as C-reactive protein, procalcitonin, interleukin-6, CD64 or sTREM-1. There are also described the basics of flow cytometry.
The practical part describes the methodology of collection and processing of peripheral blood samples, subsequent measurement using a flow cytometer, CD64 detection and gating strategy. There are also the results of the experiment and their statistical analysis.
The thesis confirmed the importance of determining CD64 expression by flow cytometry in severely ill adults for early identification of sepsis. An important finding was the possible use of this method in intensively treated hemato-oncological patients with an extremely low number of granulocytes, where the classical methods fail.
Tato diplomová práce se zabývá potenciálním využitím exprese CD64 na neutrofilních granulocytech jako markeru sepse u závažně nemocných dospělých. K jeho stanovení byla využita metoda průtokové cytomerie.
V teoretické části jsou shrnuty nejnovější poznatky o sepsi a její diagnostice pomocí markerů, jako je C-reaktivní protein, prokalcitonin, interleukin-6, CD64 či sTREM-1. Dále jsou zde popsány základy průtokové cytomerie.
V praktické části je popsána metodika odběru a zpracování vzorků periferní krve, následné měření pomocí průtokového cytometru, detekce CD64 a gatovací strategie. Dále jsou zde uvedeny výsledky experimentu a jejich statistická analýza.
Diplomová práce potvrdila význam stanovení exprese CD64 pomocí průtokové cytometrie u závažně nemocných dospělých k časné identifikaci sepse. Významným zjištěním byla možnost využití této metody u intenzivně léčených hemato onkologických pacientů s extrémně nízkým počtem granulocytů, u kterých klasické metody selhávají.
Anotace v angličtině
This thesis deals with potential use of CD64 expression on neutrophilic granulocytes as a marker of sepsis in severely ill adults. Flow cytometry was used for determination of CD64.
The theoretical part summarizes the latest knowledge about sepsis and its diagnosis using markers such as C-reactive protein, procalcitonin, interleukin-6, CD64 or sTREM-1. There are also described the basics of flow cytometry.
The practical part describes the methodology of collection and processing of peripheral blood samples, subsequent measurement using a flow cytometer, CD64 detection and gating strategy. There are also the results of the experiment and their statistical analysis.
The thesis confirmed the importance of determining CD64 expression by flow cytometry in severely ill adults for early identification of sepsis. An important finding was the possible use of this method in intensively treated hemato-oncological patients with an extremely low number of granulocytes, where the classical methods fail.
Cílem práce je ověřit možnost využití exprese CD64 na granulocytech jako časného markeru sepse u závažně nemocných (hematologické malignity, ARO, JIP). Sepse je jedním z významných faktorů mortality. Rychlejší a časnější diagnostika sepse by významně přispěla ke zkvalitnění péče o nemocné. Průtoková cytometrie je vhodným nástrojem pro rychlé a přesné stanovení exprese cílových molekul na cílových buňkách a analýza markerů sepse touto metodikou by se mohla stát funkčním diagnostickým nástrojem v rutinní praxi.
Student se bude podílet na tvorbě analytického protokolu pro stanovení exprese CD64 na granulocytech, bude provádět vlastní cytometrické analýzy a spolupracovat na statistickém vyhodnocení hypotéz.
Zásady pro vypracování
Cílem práce je ověřit možnost využití exprese CD64 na granulocytech jako časného markeru sepse u závažně nemocných (hematologické malignity, ARO, JIP). Sepse je jedním z významných faktorů mortality. Rychlejší a časnější diagnostika sepse by významně přispěla ke zkvalitnění péče o nemocné. Průtoková cytometrie je vhodným nástrojem pro rychlé a přesné stanovení exprese cílových molekul na cílových buňkách a analýza markerů sepse touto metodikou by se mohla stát funkčním diagnostickým nástrojem v rutinní praxi.
Student se bude podílet na tvorbě analytického protokolu pro stanovení exprese CD64 na granulocytech, bude provádět vlastní cytometrické analýzy a spolupracovat na statistickém vyhodnocení hypotéz.
Seznam doporučené literatury
SHAPIRO, Howard M. Practical flow cytometry. John Wiley & Sons, 2005.
TRAPPE, U.; RIESS, H. Basics in the pathophysiology of sepsis. Hamostaseologie, 2005, 25.2: 175-182.
SAUER, M., et al. Procalcitonin, C-reactive protein, and endotoxin after bone marrow transplantation: identification of children at high risk of morbidity and mortality from sepsis. Bone Marrow Transplantation, 2003, 31.12: 1137.
HOFFMANN, Johannes JML. Neutrophil CD64: a diagnostic marker for infection and sepsis. Clinical chemistry and laboratory medicine, 2009, 47.8: 903-916.
Seznam doporučené literatury
SHAPIRO, Howard M. Practical flow cytometry. John Wiley & Sons, 2005.
TRAPPE, U.; RIESS, H. Basics in the pathophysiology of sepsis. Hamostaseologie, 2005, 25.2: 175-182.
SAUER, M., et al. Procalcitonin, C-reactive protein, and endotoxin after bone marrow transplantation: identification of children at high risk of morbidity and mortality from sepsis. Bone Marrow Transplantation, 2003, 31.12: 1137.
HOFFMANN, Johannes JML. Neutrophil CD64: a diagnostic marker for infection and sepsis. Clinical chemistry and laboratory medicine, 2009, 47.8: 903-916.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
ilustrace, grafy, schémata, tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Obhajobu diplomové práce studentky Bc. Elišky Fialové zahájil prof. RNDr. Zdeněk Dvořák, DrSc. et Ph.D. Studentka seznámila komisi s hlavními částmi a výsledky své práce.
Následovalo přečtení posudku vedoucího práce RNDr. Martina Nováka, Ph.D. a oponenta Mgr. Ivo Frydrycha, Ph.D.
Studentka pak reagovala na připomínky a dotazy.
Prezentace studentky obsahovala tato témata:
- Sepse - incidence, mortalita, problémy, míra přežití
- Definice sepse Sepsis-3 pomocí SOFA a qSOFA
- Diagnostika sepse - biochemická, hematologické a mikrobiologická
- Receptor CD64 - charakteristika
- Experimentální provedení práce
V rozpravě byly uvedeny následující připomínky či nastoleny tyto problémy:
- Porovnání použití hematologického analyzátoru a průtokového cytometru
- Existence rutinního kitu pro stanovení sepse pomocí protilátek pomocí CD64
- Vysvětlení specificity a senzitivity testu
Studentka na dotazy položené oponentem práce a členy komise reagovala pohotově, věcně a přiměřeně.