Aryluhlovodíkový receptor (AhR) je ligandy-aktivovaný transkripční faktor, který je tradičně znám jako receptor zprostředkující toxické účinky environmentálních polutantů, přestože v poslední době se ukazuje, že má význam i ve fyziologii, např. pro imunitu či homeostázu kůže. Cílem této diplomové práce je prozkoumat aktivitu jednotlivých komponent jasmínového esenciálního oleje, u kterého byla dříve popsána plně agonistická aktivita vůči AhR, a u vybrané komponenty dále charakterizovat její vztah k AhR. Pomocí Reporter Gene Assay bylo popsáno šest aktivních látek - indol, eugenol, jasmon, jasmonolakton, linalool a farnesen. Jasmon, látka s antagonistickými účinky, byla vybrána pro další analýzy. Látka byla testována vůči dvěma zavedeným ligandům - 2,3,7,8 tetrachlordibenzo-p-dioxinu (TCDD) a 6-formylindol[3,2-b]karbazolu (FICZ). Konzistentně s daty z Reporter gene assay, jasmon snižoval účinky indukované pomocí TCDD, jak bylo zjištěno metodami Real-time PCR, Western blotting, Glo-Assay a chromatinové imunoprecipitace. Oproti tomu stejný efekt nebyl pozorován v kombinaci s FICZ - v tomto případě se antagonistické účinky projevily pouze při užití metody Reporter gene assay. To naznačuje, že se jasmon dá využít jako látka působící proti perzistentním ligandům AhR.
Anotace v angličtině
Aryl hydrocarbon receptor (AhR) is a ligand-activated transcription factor that has been traditionally known as a receptor that mediates toxic effects of environmental pollutants, though lately it has been shown that it also has a role in physiology, e. g. in immunity or skin homeostasis. The aim of the diploma thesis is to investigate the activity of individual components of the jasmine essential oil, which has been shown previously to have AhR-full agonist properties, with the goal to explore properties of a selected component in relation to AhR. By the means of Reporter gene assay, six AhR active compounds have been described - indole, eugenol, jasmone, jasmonolactone, linalool and farnesene. Jasmone, a compound with antagonistic properties, was chosen for further analysis. The compound was tested against established ligands - 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) and 6-formylindolo[3,2-b]carbazole (FICZ). Consistently with reporter gene assay, jasmone decreased the effects induced by TCDD as assayed by the means of Real time PCR, Western blotting, Glo-Assay and Chromatin immunoprecipitation. On the other hand, this was not observed in combination with FICZ, as jasmone antagonized this ligand only in Reporter gene assay. This suggests that jasmone could be used as a compound acting against persistent AhR ligands.
Aryluhlovodíkový receptor (AhR) je ligandy-aktivovaný transkripční faktor, který je tradičně znám jako receptor zprostředkující toxické účinky environmentálních polutantů, přestože v poslední době se ukazuje, že má význam i ve fyziologii, např. pro imunitu či homeostázu kůže. Cílem této diplomové práce je prozkoumat aktivitu jednotlivých komponent jasmínového esenciálního oleje, u kterého byla dříve popsána plně agonistická aktivita vůči AhR, a u vybrané komponenty dále charakterizovat její vztah k AhR. Pomocí Reporter Gene Assay bylo popsáno šest aktivních látek - indol, eugenol, jasmon, jasmonolakton, linalool a farnesen. Jasmon, látka s antagonistickými účinky, byla vybrána pro další analýzy. Látka byla testována vůči dvěma zavedeným ligandům - 2,3,7,8 tetrachlordibenzo-p-dioxinu (TCDD) a 6-formylindol[3,2-b]karbazolu (FICZ). Konzistentně s daty z Reporter gene assay, jasmon snižoval účinky indukované pomocí TCDD, jak bylo zjištěno metodami Real-time PCR, Western blotting, Glo-Assay a chromatinové imunoprecipitace. Oproti tomu stejný efekt nebyl pozorován v kombinaci s FICZ - v tomto případě se antagonistické účinky projevily pouze při užití metody Reporter gene assay. To naznačuje, že se jasmon dá využít jako látka působící proti perzistentním ligandům AhR.
Anotace v angličtině
Aryl hydrocarbon receptor (AhR) is a ligand-activated transcription factor that has been traditionally known as a receptor that mediates toxic effects of environmental pollutants, though lately it has been shown that it also has a role in physiology, e. g. in immunity or skin homeostasis. The aim of the diploma thesis is to investigate the activity of individual components of the jasmine essential oil, which has been shown previously to have AhR-full agonist properties, with the goal to explore properties of a selected component in relation to AhR. By the means of Reporter gene assay, six AhR active compounds have been described - indole, eugenol, jasmone, jasmonolactone, linalool and farnesene. Jasmone, a compound with antagonistic properties, was chosen for further analysis. The compound was tested against established ligands - 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) and 6-formylindolo[3,2-b]carbazole (FICZ). Consistently with reporter gene assay, jasmone decreased the effects induced by TCDD as assayed by the means of Real time PCR, Western blotting, Glo-Assay and Chromatin immunoprecipitation. On the other hand, this was not observed in combination with FICZ, as jasmone antagonized this ligand only in Reporter gene assay. This suggests that jasmone could be used as a compound acting against persistent AhR ligands.
1) Vypracování rešerše na téma diplomové práce
2) Stanovení aktivity aryluhlovodíkového receptoru metodou reporter gene assay
3) Detekce indukce exprese CYP1A1 po aplikaci vybraných komponent esenciálních olejů
4) Vypracování diplomové práce a multimediální prezentace k obhajobě diplomové práce
Zásady pro vypracování
1) Vypracování rešerše na téma diplomové práce
2) Stanovení aktivity aryluhlovodíkového receptoru metodou reporter gene assay
3) Detekce indukce exprese CYP1A1 po aplikaci vybraných komponent esenciálních olejů
4) Vypracování diplomové práce a multimediální prezentace k obhajobě diplomové práce
Seznam doporučené literatury
Bartonkova I, Dvorak Z: Essential oils of culinary herbs and spices display agonist and antagonist activities at human aryl hydrocarbon receptor AhR, Food and Chemical Toxicology 111, 2018
Ehrlich A, Kerkvliet N: Is chronic AhR activation by rapidly metabolized ligands safe for the treatment of immune-mediated diseases? Current opinion in Toxicology 2, 2017
Články publikované v odborných periodicích
Seznam doporučené literatury
Bartonkova I, Dvorak Z: Essential oils of culinary herbs and spices display agonist and antagonist activities at human aryl hydrocarbon receptor AhR, Food and Chemical Toxicology 111, 2018
Ehrlich A, Kerkvliet N: Is chronic AhR activation by rapidly metabolized ligands safe for the treatment of immune-mediated diseases? Current opinion in Toxicology 2, 2017
Články publikované v odborných periodicích
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
Obhajobu diplomové práce studentky Bc. Adély Marcalíkové zahájil prof. RNDr. Zdeněk Dvořák, DrSc. et Ph.D.
Studentka seznámila komisi s hlavními částmi a výsledky své práce.
Následovalo přečtení posudku vedoucího práce Doc. Ing. Radima Vrzala, Ph.D. a oponentky PharmDr. Lenky Zemánkové, Ph.D.
Studentka pak reagovala na připomínky a dotazy.
Prezentace studentky obsahovala tato témata:
- Aryluhlovodíkový receptor - charakteristika, funkce, ligandy
- Esenciální oleje - charakteristika, výroba, využití
- Experimentální provedení práce
V rozpravě byly uvedeny následující připomínky či nastoleny tyto problémy:
- Tapinarof - charakteristika, použití, klinické studie
- Použití různých buněčných linií pro různé experimenty
- Vhodné testy pro studium účinků jasmonu
- Metody stanovení viability buněk
- Jasmín vs. pustoryl
Studentka na dotazy položené oponentkou práce a členy komise reagovala pohotově, věcně a přiměřeně.