Biogenní aminy vznikají především dekarboxylací příslušných aminokyselin a jsou dále oxidovány aminoxidasami (EC 1.4.3.21, EC 1.4.3.22) na příslušné aldehydy. Biogenní aminy se přirozeně vyskytují v potravinách, přičemž jejich množství se může výrazně zvýšit mikrobialní kontaminací. Ve vyšších koncentracích jsou biogenní aminy (zejména histamin a tyramin) toxické.
V rámci experimentální části práce byly vypěstovány hrachové klíčky, z nichž byla s následně izolovaná a purifikována hrachová aminoxidasa (PsAO). Dále byla změřena substrátová specifita PsAO a kinetika reakcí vybraných aminů a směsi aminů, detekována pomocí spřažené peroxidasové reakce. Dalším cílem bylo měření koncentrace biogenních aminů ve vzorcích piva za využití aminoxidasy, kdy vzorky piva sloužily jako substráty hrachové aminoxidasy. Jako referenční metoda pro určení koncentrace biogenních aminů ve vzorcích piv byla použita UHPLC-MS/MS.
Anotace v angličtině
Biogenic amines are formed primarily by decarboxylation of the respective amino acids and are further oxidized by the amine oxidases (EC 1.4.3.21, EC 1.4.3.22) to the corresponding aldehydes. Biogenic amines are naturally occurring in food. Their concentration can be increased by microbial contamination. At higher concentrations, biogenic amines are toxic, especially histamine and tyramine.
In the experimental part of the work pea seedlings were grown and pea amine oxidase (PsAO) subsequently isolated and purified The substrate specificity of PsAO as well as the kinetics of the reaction of selected amines and amine mixtures were measured by using a coupled peroxidase reaction. The last task was to measure the concentration of biogenic amines in beer samples using amine oxidase reaction, where beer samples were used as pea amine oxidase substrates. UHPLC MS/MS was used as a reference method for determining of concentration of biogenic amines in beer samples.
Klíčová slova
Hrachová aminoxidasa, biogenní aminy, detekce biogenních aminů v pivu
Klíčová slova v angličtině
Pea diamine oxidase, biogenic amines, biogenic amines in beer
Rozsah průvodní práce
52s
Jazyk
CZ
Anotace
Biogenní aminy vznikají především dekarboxylací příslušných aminokyselin a jsou dále oxidovány aminoxidasami (EC 1.4.3.21, EC 1.4.3.22) na příslušné aldehydy. Biogenní aminy se přirozeně vyskytují v potravinách, přičemž jejich množství se může výrazně zvýšit mikrobialní kontaminací. Ve vyšších koncentracích jsou biogenní aminy (zejména histamin a tyramin) toxické.
V rámci experimentální části práce byly vypěstovány hrachové klíčky, z nichž byla s následně izolovaná a purifikována hrachová aminoxidasa (PsAO). Dále byla změřena substrátová specifita PsAO a kinetika reakcí vybraných aminů a směsi aminů, detekována pomocí spřažené peroxidasové reakce. Dalším cílem bylo měření koncentrace biogenních aminů ve vzorcích piva za využití aminoxidasy, kdy vzorky piva sloužily jako substráty hrachové aminoxidasy. Jako referenční metoda pro určení koncentrace biogenních aminů ve vzorcích piv byla použita UHPLC-MS/MS.
Anotace v angličtině
Biogenic amines are formed primarily by decarboxylation of the respective amino acids and are further oxidized by the amine oxidases (EC 1.4.3.21, EC 1.4.3.22) to the corresponding aldehydes. Biogenic amines are naturally occurring in food. Their concentration can be increased by microbial contamination. At higher concentrations, biogenic amines are toxic, especially histamine and tyramine.
In the experimental part of the work pea seedlings were grown and pea amine oxidase (PsAO) subsequently isolated and purified The substrate specificity of PsAO as well as the kinetics of the reaction of selected amines and amine mixtures were measured by using a coupled peroxidase reaction. The last task was to measure the concentration of biogenic amines in beer samples using amine oxidase reaction, where beer samples were used as pea amine oxidase substrates. UHPLC MS/MS was used as a reference method for determining of concentration of biogenic amines in beer samples.
Klíčová slova
Hrachová aminoxidasa, biogenní aminy, detekce biogenních aminů v pivu
Klíčová slova v angličtině
Pea diamine oxidase, biogenic amines, biogenic amines in beer
Zásady pro vypracování
Teoretická část se skládá z literární rešerše o tématech biogenních aminy a polyaminy, aminooxidasy a aminy obsažené v pivu.
Experimetnální část se zabývá izolací aminoxidasy z klíčků hrachu setého (PsAO), substrátovou specifičností PsAO vůči biogenním aminům přítomných v pivu a kinetickými měřeními účinku PsAO u vybraných substrátů. Na závěr proběhne měření se směsí aminů v poměru koncentrací typickém pro pivo a s vybranými vzorky piva jakožto substráty PsAO.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Práce bude odevzdána na sekretariátě Katedry biochemie ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce, a to v řádném termínu uvedeném v harmonogramu Katedry biochemie.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Zásady pro vypracování
Teoretická část se skládá z literární rešerše o tématech biogenních aminy a polyaminy, aminooxidasy a aminy obsažené v pivu.
Experimetnální část se zabývá izolací aminoxidasy z klíčků hrachu setého (PsAO), substrátovou specifičností PsAO vůči biogenním aminům přítomných v pivu a kinetickými měřeními účinku PsAO u vybraných substrátů. Na závěr proběhne měření se směsí aminů v poměru koncentrací typickém pro pivo a s vybranými vzorky piva jakožto substráty PsAO.
Závěrečná práce bude vypracována v souladu s doporučeným stylem pro závěrečné práce na oboru Biochemie PřF UP uvedeným na webové stránce Katedry biochemie (http://biochemie.upol.cz/index.php/cs/studium/zaverecne-prace).
Práce bude odevzdána na sekretariátě Katedry biochemie ve dvou svázaných výtiscích obsahujících CD s elektronickou verzí závěrečné práce, a to v řádném termínu uvedeném v harmonogramu Katedry biochemie.
Student je povinen vložit ekvivalentní elektronickou podobu závěrečné práce do systému STAG a doplnit povinné údaje o své práci (viz Opatření děkana Přírodovědecké fakulty UP v Olomouci k provedení některých ustanovení
Studijního a zkušebního řádu UP v Olomouci a Rigorózního řádu UP v Olomouci).
Seznam doporučené literatury
- VIANELLO F., MALEK-MIRZAYANS A., DI PAOLO M. L., STEVANATO R., RIGO A. (1999): Purification and Characterization of Amine Oxidase from Pea Seedlings. Protein Expresion and Purification 15, 196-201.
- PIETRANGELI P., FEDERICO R., MONDOVI B., MORPURGO L. (2007): Substrate specificity of copper-containing plant amine oxidases. Journal of Inorganic Biochemistry 111, 997-1004.
- BEATRIZ M., GLÓRIA A., IZQUIERDO-PULIDO M. (1999): Levels and Significance of Biogenic Amines in Brazilian Beers. Journal of Food Composition and Analysis 12, 129-136.
- ŠEBELA M., LUHOVÁ L., FRÉBORT I., FAULHAMMER H. G., HIROTA S., ZAJONCOVÁ L., STUŽKA V., PEČ P. (1998): Analysis on the Active Sites of Copper/Topa Quinone-containing Amine Oxidases from Lathyrus odoratus and L. sativus Seedlings. Phytochemical Analysis 9, 211-222.
- KALAČ P., ŠAVEL J., KŘÍŽEK M., PELIKÁNOVÁ T., PROKOPOVÁ M. (2002): Biogenic amine formation in bottled beer. Food Chemistry 79, 431-434.
Seznam doporučené literatury
- VIANELLO F., MALEK-MIRZAYANS A., DI PAOLO M. L., STEVANATO R., RIGO A. (1999): Purification and Characterization of Amine Oxidase from Pea Seedlings. Protein Expresion and Purification 15, 196-201.
- PIETRANGELI P., FEDERICO R., MONDOVI B., MORPURGO L. (2007): Substrate specificity of copper-containing plant amine oxidases. Journal of Inorganic Biochemistry 111, 997-1004.
- BEATRIZ M., GLÓRIA A., IZQUIERDO-PULIDO M. (1999): Levels and Significance of Biogenic Amines in Brazilian Beers. Journal of Food Composition and Analysis 12, 129-136.
- ŠEBELA M., LUHOVÁ L., FRÉBORT I., FAULHAMMER H. G., HIROTA S., ZAJONCOVÁ L., STUŽKA V., PEČ P. (1998): Analysis on the Active Sites of Copper/Topa Quinone-containing Amine Oxidases from Lathyrus odoratus and L. sativus Seedlings. Phytochemical Analysis 9, 211-222.
- KALAČ P., ŠAVEL J., KŘÍŽEK M., PELIKÁNOVÁ T., PROKOPOVÁ M. (2002): Biogenic amine formation in bottled beer. Food Chemistry 79, 431-434.
Přílohy volně vložené
-
Přílohy vázané v práci
grafy, tabulky
Převzato z knihovny
Ano
Plný text práce
Přílohy
Posudek(y) oponenta
Hodnocení vedoucího
Záznam průběhu obhajoby
V úvodu obhajoby předsedkyně komise doc. RNDr. Lenka Luhová, Ph.D. představila studentku přítomným akademickým pracovníkům a hostům. V rámci prezentace své práce studentka seznámila všechny zúčastněné s cíli práce a hlavními metodami využitými při jejím zpracování, dále se získanými výsledky a z nich vyplývajícími závěry.
Následně byl přečten oponentní posudek. Odpovědi na otázky a připomínky uvedené v posudku oponenta a vedoucího bakalářské práce studentka zodpověděla uspokojivě, doložila je vypracované v písemné formě a prezentovala také ústně.
V rámci veřejné diskuse zodpověděla následující dotazy položené přítomnými odborníky: V úvodu obhajoby předsedkyně komise doc. RNDr. Lenka Luhová, Ph.D. představila studentku přítomným akademickým pracovníkům a hostům. V rámci prezentace své práce studentka seznámila všechny zúčastněné s cíli práce a hlavními metodami využitými při jejím zpracování, dále se získanými výsledky a z nich vyplývajícími závěry.
Následně byl přečten oponentní posudek. Odpovědi na otázky a připomínky uvedené v posudku oponenta a vedoucího bakalářské práce studentka zodpověděla uspokojivě, doložila je vypracované v písemné formě a prezentovala také ústně.
V rámci veřejné diskuse zodpověděla následující dotazy položené přítomnými odborníky:
doc. Luhová: Na jaké další optimalizační kroky máte v plánu se v budoucnu zaměřit?
doc. Petřivalský: Můžete blíže popsat 2D ionexové chromatografie?
dr. Danihlík: Jsou stanoveny nějaké hygienické limity pro polyaminy v nápojích?
dr. Zalabák: Liší se kvalita piva z minipivovarů oproti velkopivovarům? Jaký objem vzorku potřebujete k analýze?
prof. Frébort: Co je širším záměrem Vaší práce?